一种耐热大肠菌群分离方法

大肠菌群是指在37℃条件下24h内能够发酵乳糖产酸产气的无芽孢革兰阴性杆菌，主要包括肠杆菌科的4个属即埃希氏菌属 (Escherichia)、枸橼酸杆菌属(Citrobacter)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)和肠杆菌属(Enterobacter)的细菌。该类细菌主要来源于人和温血动物的粪便，故将大肠菌群作为食品被人和温血动物粪便污染的指示菌来评价食品的卫生质量。

耐热大肠菌群（thermotoletant coliform bacteria）是总大肠菌群的一部分，将培养温度提高到44～45℃，在此条件下仍能生长和发酵乳糖的菌群被称为耐热大肠菌群（或粪大肠菌）。北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA。SN中的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法，故而使用粪大肠菌群概念；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”。一般欧洲学者认为，“粪大肠菌群”的提法不太科学，耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。

我国生活饮用水卫生标准规定每100 mL 水样中不得检出耐热大肠菌群。用该菌的检出情况来判断水中是否受到人畜粪便的污染。耐热大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反应了对人体健康危害程度的大小。粪便是人畜肠道排泄物，其中有健康的，也有肠道带菌的，粪便内除一般正常外，同时也会有一些肠道致病菌存在，所以水中有粪便污染，则可能推测水中着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着与水有关的传染病，对人体健康具有潜在的危险性。目前检测耐热大肠菌群的方法有酶底物法、多孔微板法、纸片法、荧光原位杂交法、PCR法等。但多存在技术不完整，检测成本高，操作繁琐等缺点，目前，国标GB/T5750-2006《生活饮用水标准检测方法》中耐热大肠菌群的方法有多管发酵法和膜过滤法。

HiMedia公司（微生物培养基生产商）生产的货号：M1571是一种用于检测和计数水中耐高温大肠菌群膜过滤法。经过改良的培养基中含有显色原、5-溴-6-氯-3-吲哚-β-D-葡糖苷酸，被大肠菌群由酶-葡糖醛酸酶裂解生成葡萄糖醛酸，只对大肠杆菌的菌落显色形成紫色菌落。培养基中的蛋白栋和酵母提取物为菌种提供了必需的营养素，乳糖是可发酵的碳水化合物，氯化钠保持渗透平衡，磷酸二氢钾和磷酸二钾提供强有力的缓冲，在发酵作用下控制pH值，十二烷基硫酸钠和脱氧胆酸钠通过抑制革兰阳性细菌使培养基更有选择性。通过膜过滤器，通过水样本被涂到培养基上。培养基在44.5±0.2 ℃，培养22-24h。大肠杆菌将在膜过滤培养基上形成紫色到洋红色的菌落。

HiMedia公司的耐热大肠菌群显色培养基在上被广泛应用，如HeyangYuan等人研究电子受体对厌氧条件下抗生素抗性大肠杆菌、抗性基因和1类整合子基因敲除的影响文章中就有应用（HeyangYuan, Jennifer H.Miller, Ibrahim M.Effects of electron acceptors on removal of antibiotic resistant Escherichia coli, resistance genes and class 1 integrons under anaerobic conditions.Science of The Total Environment[J], 2016(11)1 : 1587-1594.）；Jvo Siegrist也用它鉴别和检测大肠杆菌和其他大肠菌群中也有应用（Jvo Siegrist.Selective Growth Media for Differentiation and Detection of Escherichia Coli and Other Coliforms. Product Manager Microbiology[J]. 2011,11(8):1-5.）