Vero细胞无血清培养基的设计和优化

培养基是影响体外培养细胞生长代谢、增殖乃至生存的直接和重要的环境因素。Vero细胞无血清培养的技术关键在于无血清培养基的设计和优化。设计Vero细胞无血清培养基组成配方的技术核心是筛选和确定具有促进细胞贴附生长、维持细胞存活、提高病毒扩殖效果的培养基组成成分。

基于细胞生长和代谢的高通量分析及Plackett-Burman实验设计和Box-Behnken响应面设计是Vero细胞无血清培养基设计和优化的主要技术。Vero细胞的培养需要在适宜的介质表面贴附、铺展才开始有丝分裂、增殖，病毒的有效感染和增殖也有赖于细胞的贴附生长状态。

此外，在某些病毒疫苗(如流感病毒疫苗)的生产过程中，需要在培养基中加人一定浓度的胰蛋白酶以提高病毒的感染和增殖效率。

另一方面，病毒的感染和增殖不仅是细胞代谢负荷不断加大的过程，也是细胞病变、以致凋亡和坏死、甚至裂解的渐进性过程。Vero细胞无血清培养基的设计和优化相对于应用于动物细胞悬浮培养工艺生产重组蛋白、特别是治疗性抗体生产的无血清培养基更具挑战性。

设计Vero细胞无血清培养基的较为便捷和有效的策略是以DMEM，F-12, M199和RPMI1640等商品化的合成培养基的单独使用或联合使用为基础培养基，以反映细胞生长和代谢的主要参数为评价指标，结合统计学方法确定向其中添加生长因子、激素、结合蛋白及豁附因子、微量元素、脂类和脂类前体物等的种类和浓度。

缔一生物为您推荐一款可用于Vero细胞无血清培养的基础培养基，由HiMedia公司生产的SFRE199-1和SFRE199-2，是培养基M199的改良款。其改变了M199培养基的部分营养成分配方，主要在增加了氨基酸和葡萄糖的浓度，并加入硫酸锌、丙酮酸钠和鱼精蛋白锌胰岛素。另外，还降低了硝酸铁、黄嘌呤和碳酸氢钠的浓度。SFRE 199-1有Hank's盐；SFRE 199-2含有Earle's盐，不含胰岛素，可在使用前自行添加。

无血清培养基中常用的黏附因子主要是存在于细胞间质和血清中的胞外基质(extracellular matrix,ECM)蛋白，如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、玻连蛋白和胶原等。其中，纤粘连蛋白和层粘连蛋白不仅具有提高细胞的砧附力及活力的作用，同时在促进有丝分裂中也起着重要的作用。某些含有精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸(RGD)序列的短肤也能够有效地促进Vero细胞贴附到以聚苯乙烯和醋酸纤维素为材料的介质表面。

Vero细胞无血清培养基的优化主要涉及以下两方面。其一，从提高病毒疫苗安全性的需要出发，以非动物来源成分替代动物来源成分、化学组分明确成分替代化学组分不确定成分，其二，从提高病毒疫苗生产效率的目的考虑，根据细胞生长和代谢动力学特征优化培养基的组成。

缔一生物作为HiMedia公司在中国的代理商，在细胞培养、微生物培养及检测领域，一如既往地为您带来的服务。