细胞冻存后如何复苏？

细胞复苏是一简单的试验操作，但操作中有许多需要注意的事项，在实验操作中注意细小问题，才能使复苏后的细胞状态保持良好。现将细胞复苏的操作程序和注意事项总结如下。

1. 细胞实验室进行常规消毒，紫外照射30 min以上，超净台开启通风10 min。

2. 将新鲜培养基置于37℃恒温水浴锅中回温，回温后喷以70 % 酒精并擦拭，移入无菌操作台内。将10 ml左右新鲜培养基移入无菌细胞培养瓶中，备用。

3. 从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入40℃水浴中，轻摇冷冻管使其在快速全部融化，以70 % 酒精擦拭冻存管外部，移入无菌操作台内。

4. 将细胞悬液移入已加培养基的细胞培养瓶中，放CO₂培养箱中培养。

5. 待细胞贴壁后（根据细胞种类贴壁时间不同，一般4小时左右），弃去含有冷冻保护剂的培养基，加入新鲜培养基继续培养。

【注意事项】

1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。

2. 常温下二甲基亚砜（DMSO）对细胞的毒副作用较大，因此，必须在1~2 min内使冻存液*融化。如果复苏温度太低，会造成细胞的损伤，所以选择40℃复苏。

3. 贴壁细胞复苏实验标准流程是将解冻后的细胞悬液先进行离心，以去除冷冻保护液DMSO对细胞的损伤，但是离心也会对刚复苏的状态欠佳的细胞产生损伤。也有的实验操作是将解冻后的细胞悬液先直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。这可能使培养基中少量的DMSO对细胞造成损伤。

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