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新一代细胞增殖追踪技术问世,新生牛血清助力科研

更新时间:2023-06-11  |  点击率:387

随着细胞生物学的发展,细胞增殖过程的奥秘被逐步揭开。而牛血清制备技术的不断革新,也在一定程度上助力细胞生物学的发展。新生牛血清是一类比较常见的牛血清,营养成分的丰富度虽不及胎牛血清,但优质的新生牛血清,仍然足以供给大部分细胞的生长繁殖。Ausbian进口新生牛血清,富含各类营养成分,内毒素含量低。

 

测量体内细胞增殖对我们理解器官发育、疾病和组织再生具有重要意义。揭示不同细胞类型的增殖动力学对于寻找新的疾病治疗方法和提供组织再生的新视角也十分重要。检测细胞增殖的成熟方法包括对组织切片上的增殖标记物进行免疫染色,在新合成的DNA中加入DNA类似物,以及在细胞周期中通过合成代谢检测合并的同位素。

 

然而,目前追踪细胞增殖的方法的局限性在不同的生命科学领域留下了许多未解决的问题。

 

首先,增殖标记物的免疫染色只能提供细胞增殖的快照,使得检测罕见的增殖细胞在技术上具有挑战性。其次,目前的检测方法不能提供直接的细胞类型特异性增殖信息。这是一个重要的问题,特别是对于那些只有较差染色谱系标记与增殖标记共同免疫染色的细胞类型。它对于被其他更频繁分裂的细胞包围的很少增殖的细胞类型也很重要,其中需要谱系信息来增加信号与背景比。

 

另外,可以评估纯化后细胞增殖的方法(例如FACS)将能够研究细胞类型特异性更新,尽管它们失去了原位增殖信息。生命科学中的许多争议可以通过建立新的增殖检测方法来解决,包括肝稳态和肝损伤后的肝细胞再生。

 

谱系追踪可用于测量活体细胞的增殖,并且根据报告小鼠系的选择,它可以用细胞质或核信号标记细胞。在体内追踪细胞命运广泛使用的技术是cre - loxp介导的遗传谱系追踪。在这种方法中,Cre重组酶由特定基因的表达调控元件驱动,去除报告基因等位基因中loxp -侧翼的转录停止盒,从而产生报告基因的表达(例如GFPtdTomato)。人雌激素受体可以与Cre重组酶融合,使Cre活性被他莫昔芬诱导。Ki67的启动子(一种广泛使用的细胞增殖标记物)已被用来驱动CreER在他莫昔芬给药后追踪Ki67+心肌细胞。然而,Ki67-IRES-CreER捕获的增殖心肌细胞百分比远低于同种型合并捕获的心肌细胞百分比。这可能是因为他莫昔芬诱导的Cre活性只能持续12-24小时,因为他莫昔芬的血清半衰期。此外,当他莫昔芬治疗与Ki67启动子活性不同步时,Ki67- ires - creer无法捕获增殖信号。因此,随着时间的推移,无缝捕获Ki67+细胞是一项技术挑战,因为连续重复的他莫昔芬治疗既麻烦又有害。

 

近日,研究人员开发了了一种检测细胞增殖的遗传方法:使用遗传谱系追踪技术以组织特异性的方式实现体内细胞增殖的无缝记录。该研究提供了一个详细的方案(小鼠系的产生,小鼠系的表征,小鼠系杂交和细胞增殖追踪),用于使用该遗传系统研究细胞增殖。

 

这种细胞增殖追踪系统,我们称之为“ProTracer"(增殖追踪器),允许对活体动物中特定细胞系的细胞增殖进行终身无创监测。与其他需要处死动物的短期策略相比,ProTracer不需要采样或牺牲动物进行组织处理。为了突出这些特征,研究人员使用ProTracer研究了小鼠肝脏稳态和组织损伤后肝细胞的增殖。技术实现了多个方面的突破,包括在体内长时间不间断地示踪细胞增殖,实现了细胞类型特异性的细胞增殖检测以及活体检测细胞增殖等。