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『支原体清除计划』,为细胞培养保驾护航

更新时间:2023-07-25  |  点击率:293

支原体(mycoplasma)是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基部分培养增殖的,原核细胞型微生物。支原体也是造成生物学实验室中,细胞污染的“主力选手"之一。

在普通光学显微镜下,几乎看不到支原体的身影,因此如果细胞被支原体污染,前期很难被发现,而支原体污染,又会对细胞实验产生严重的影响,包括但不限于以下几点:

1、支原体感染细胞株会导致细胞失去正常生长和功能,影响实验结果的可靠性和准确性。它可以导致细胞形态的改变、细胞增殖的异常以及细胞功能的异常。

2、支原体在细胞培养中传播非常迅速,很容易通过细胞培养物、细胞悬液、细胞培养用具等途径传播到其他细胞培养中,进一步污染更多的细胞株。

3、支原体感染可能导致实验结果的误解,因为实验结果中的观察结果可能不再是由所研究的细胞本身导致的,而是由支原体感染导致的变化。

因此,要通过有效、安全、高效的手段,预防/清除支原体污染。关于与支原体的“大战",我们总结了以下几个关键点,希望本期“支原体清除计划"可以为大家的细胞实验带来帮助。


Round 1:实验室环境的清洁

细胞实验,需要在严格无菌的环境下进行。因此,维持实验室的无菌环境十分重要。实验环境包括实验空间、实验室内的仪器设备、实验人员。

可采用甲醛高锰酸钾熏蒸消毒的方法对实验室内部空间进行消毒,消毒期间需人员撤离,密闭消毒空间24h以上,该方法虽然能有效对实验空间进行清洁消毒,但甲醛有刺激气味,对人和细胞都有毒性作用。细胞间1-2周无法使用,因此更推荐用紫外线灯进行照射灭菌。在每次实验开始前,打开紫外线灯,设置好安全标识,照射实验室内部空间30分钟以上,也能达到不错的灭菌效果。

对于实验室内的仪器设备,可采用消毒液、75%酒精擦拭等方法进行消毒。该方法中所使用的消毒试剂,多数也都有挥发性,对操作人员有毒性作用,且对部分微生物无效。

因此,推荐使用更为专业的微生物祛除试剂:Mycoplasma-off支原体祛除喷雾剂(即用型),含有支原体杀除剂Mynox®,可在几分钟内迅速杀除支原体。,并且对绝大部分真菌细菌甚至是病毒都有效。

使用起来便捷高效,将Mycoplasma-Off®均匀喷于待消毒的洁净台或实验设备和器材的表面,等待5-10分钟,可用用干燥纸巾将已喷过Mycoplasma-Off®的洁净台或实验设备和器材的表面搽拭干净即可。

培养箱水槽、水浴锅这类卫生死角,也应做好支原体预防工作,定期更换无菌水,添加用于水槽的支原体清除试剂:Water Shield™  。

实验人员在细胞实验开始前,也应做好相应的消毒防护。使用适当的个人防护装备,如手套、口罩和防护服等;以及遵循良好的实验室操作,如避免不同来源的培养物之间的接触;在实验过程中,严格遵守实验室中物品摆放准则,以培养箱举例:培养皿摆放密度应合理,宜少不宜多等。


Round 2:选择高品质的实验试剂

实验试剂也是细胞支原体污染的来源之一,选择合规的、高品质的实验试剂也是预防支原体污染的关键点之一。

胎牛血清作为细胞培养实验中重要的添加成分,含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,其组成成份大部分已知,但还有一部分尚不清楚,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。其品质直接影响实验结果的稳定性。

高品质的血清,应通过各类严格的质量检测、各项指标均应符合标准并能提供检测报告。其中,微生物及病毒相关的检测项目,均应呈现“未检出"。

Ausbian进口特级胎牛血清,不仅在微生物检测指标方面符合标准,内毒素含量也很低,≤3EU/ml,澳洲血源,全程冷链运输,尽可能避免反复冻融的情况发生。


Round 3:监控细胞状态

在进行细胞实验期间,要密切监测细胞培养物的污染迹象,对于细胞状态突变保持警惕(如培养基频繁变色、细胞生长缓慢等)。在细胞复苏、细胞冻存或者进行其他关键的实验操作步骤前,如条件允许,建议对细胞进行取样,进行支原体检测,包括常规PCR和qPCR等方法,方便快捷。

如果需要进行方法学验证,则推荐使用Venor®GeM qEP支原体qPCR检测试剂盒。配合Venor®GeM Sample Preparation支原体DNA提取试剂盒以及支原体标准品一起使用,完成方法学验证。


Round 4:支原体祛除 

对于费力扩增的细胞(如已转染,或经过体外刺激),如果细胞中发现有支原体污染,但此细胞又不愿丢弃,希望继续培养,推荐使用MB公司生产的复合抗生素Zell Shield®。在每次使用Zell Shield®之前,细胞传代时,先使用厂家推荐的“悬浮冲洗法"处理好细胞,再使用加了Zell Shield®的培养基养细胞,能达到更好的祛除支原体的效果。

非常珍贵的细胞或不易获得的生物样本,被支原体污染了,但需要挽救,不能丢弃, 例如:稀有的细胞种子。可采用支原体清除法。 若是可以培养超过一个月的细胞,则推荐使用德国MB公司的Mynox® Gold,直接杀除+巩固防护两步处理。

若是无法长期培养的珍贵样本或病毒收获液,则推荐使用德国MB公司的Mynox® ,处理3小时,直接杀除。