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支原体检测,测的是什么?上清 or 细胞?

更新时间:2023-08-25  |  点击率:210

在细胞治疗、疫苗生产等领域,药物在上市前,需要通过支原体检测,证明生产过程中没有支原体的污染。一般情况下,支原体附着在细胞表面,因此,在检测前,收集细胞后,保留上清,用于后续检测实验。

 

德国MB公司生产的Venor®GeM qEP试剂盒设计用于定量检测细胞培养物和其他生物基质中的支原体, 该试剂盒是基于实时或定量PCR (qPCR),作为快速,稳健和敏感支原体的,可替代《药典》种传统方法的检测手段。

 

该检测针对支原体基因组中的一个高度保守区域,以检测欧洲药典第2.6.7(EP 2.6.7)、日本药典第G3(JP G3)和更多物种(检测特征"一节中的列表)中包含的所有物种。

 

该产品已通过广泛的qPCR设备成功测试。试剂盒设计满足EP 2.6.7JP G3对不同样品材料(软骨细胞、血清、细胞培养上清等)提取样品DNA后的检测标准。

 

实验开始时,需要先收集细胞培养上清,如果细胞含量较低,可对培养物进行富集。用支原体提取试剂盒,对其中的DNA进行提取。

 

整个测试需要不到3小时,并且与基于发光的酶测定、荧光染色或培养方法相比,不需要活的支原体细胞。值得注意的是,与几种生化和细胞方法相比,PCR检测被认为在灵敏度和精度方面优越。该试剂盒包含所有必要的PCR成分,包括热启动Taq聚合酶,引物和dNTPs在冻干混合物(支原体混合物)以及补液缓冲液和PCR级水。

 

德国MB还可提供10CFU/100CFU的配套标准品,以及各类支原体基因组DNA,帮助相关项目完成药典的方法学验证。