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如何挑选合适的『支原体检测』试剂盒?

更新时间:2023-08-29  |  点击率:295

细胞培养过程中,如果发生支原体污染,很容易影响细胞的生长、代谢和行为,导致实验结果出现异常。长期存在的支原体污染可能对细胞系的健康产生负面影响,甚至可能改变细胞系的基因表达和生物学特性。

因此,细胞学相关的基础研究中,需要做好严格地卫生清洁工作,预防支原体污染,并使用方便快捷的方法,监测实验室及实验品中是否存在支原体污染。

如果需要定期检测细胞实验室中的培养物,是否存在支原体污染,推荐使用德国Minerva Biolabs公司生产的Venor® Gem Classic支原体常规PCR检测试剂盒。

通过扩增16S rRNA编码区来特异性检测支原体,而真核生物和其他细菌DNA(除“检测特征"部分报道的DNA外)在Venor®GeM Classic检测中不扩增。

根据支原体种类的不同,扩增子的大小在265-278 bp之间

Venor®GeM Classic常规PCR检测试剂盒经典法特点:

1.内控对照为独立包装,遵循欧洲药典和日本药典操作流程。

2.高特异性,仅一条阳性对照条带,即可涵盖所有可能感染细胞的支原体物种。操作简单,易于观察。

3.高灵敏度,若PCR反应体系加入10μl样本,支原体检测限度为≤5或≤10CFU。

4.欧洲药典要求的26种支原体均可检出。该试剂盒可检测出1种脲原体、7种无胆甾原体和85种支原体,与细胞和真核DNA无交叉反应。

5.试剂盒中不含Taq酶,可另外购买。推荐使用德国MB公司的Taq酶。

通过生物技术生产的药物、疫苗和其他治疗性产品,其制备过程涉及细胞培养、发酵和其他复杂的生物学过程。如果该过程存在支原体污染,则可能会对产品质量产生严重影响,甚至可能引发潜在的安全隐患。

各国对于生物医药制品的生产过程中,支原体的检测有着严格的要求。《药典》中规定“培养法"和“指示细胞法"是传统方法,如果用核酸法替代传统方法,需要经过方法学验证。

因此,在选择临床项目申报所用的支原体检测试剂盒时,需选择通过《药典》方法学验证的试剂盒。需要兼顾灵敏度和特异性。

在常规PCR基础上,将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记,使PCR扩增后的产物带有荧光,利用荧光信号的变化和配套软件,进行DNA扩增反应的实时监测,简称qPCR。

qPCR实验优点:

①灵敏度高、特异性强。

②时间短,2-3小时出结果

③检测结果可定量

④操作简便

综上,支原体qPCR检测试剂盒比较合适的选择。

德国MB支原体qPCR检测试剂盒:

Venor®Gem qEP

产品特点:

①经典法qPCR试剂盒遵循欧洲药典流程要求

②高特异性,一次检测即可涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种(涵盖欧洲药典规定的9种支原体),根据序列一致性,至少可以检测到107种支原体物种。操作简单,易于观察。

③高灵敏度,MB公司的支原体qPCR检测试剂盒经典法检测限可达到≤10CFU/ml。

④MB公司有相应配套的10CFU/100CFU的敏感度测试的标准品,便于方法学验证。

⑤MB公司有相应配套的支原体基因组DNA和细菌基因组DNA,便于特异性验证。

⑥MB公司有相应配套的支原体绝对定量标准品,便于最后定量检测。

⑦内控对照为独立包装,遵循欧洲药典和日本药典操作流程。