如何挑选合适的『支原体检测』试剂盒？

细胞培养过程中，如果发生支原体污染，很容易影响细胞的生长、代谢和行为，导致实验结果出现异常。长期存在的支原体污染可能对细胞系的健康产生负面影响，甚至可能改变细胞系的基因表达和生物学特性。

因此，细胞学相关的基础研究中，需要做好严格地卫生清洁工作，预防支原体污染，并使用方便快捷的方法，监测实验室及实验品中是否存在支原体污染。

如果需要定期检测细胞实验室中的培养物，是否存在支原体污染，推荐使用德国Minerva Biolabs公司生产的Venor® Gem Classic支原体常规PCR检测试剂盒。

通过扩增16S rRNA编码区来特异性检测支原体，而真核生物和其他细菌DNA(除“检测特征"部分报道的DNA外)在Venor®GeM Classic检测中不扩增。

根据支原体种类的不同，扩增子的大小在265-278 bp之间。

Venor®GeM Classic常规PCR检测试剂盒经典法特点：

1.内控对照为独立包装，遵循欧洲药典和日本药典操作流程。

2.高特异性，仅一条阳性对照条带，即可涵盖所有可能感染细胞的支原体物种。操作简单，易于观察。

3.高灵敏度，若PCR反应体系加入10μl样本，支原体检测限度为≤5或≤10CFU。

4.欧洲药典要求的26种支原体均可检出。该试剂盒可检测出1种脲原体、7种无胆甾原体和85种支原体，与细胞和真核DNA无交叉反应。

5.试剂盒中不含Taq酶，可另外购买。推荐使用德国MB公司的Taq酶。

通过生物技术生产的药物、疫苗和其他治疗性产品，其制备过程涉及细胞培养、发酵和其他复杂的生物学过程。如果该过程存在支原体污染，则可能会对产品质量产生严重影响，甚至可能引发潜在的安全隐患。

各国对于生物医药制品的生产过程中，支原体的检测有着严格的要求。《药典》中规定“培养法"和“指示细胞法"是传统方法，如果用核酸法替代传统方法，需要经过方法学验证。

因此，在选择临床项目申报所用的支原体检测试剂盒时，需选择通过《药典》方法学验证的试剂盒。需要兼顾灵敏度和特异性。

在常规PCR基础上，将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记，使PCR扩增后的产物带有荧光，利用荧光信号的变化和配套软件，进行DNA扩增反应的实时监测，简称qPCR。

qPCR实验优点：

①灵敏度高、特异性强。

②时间短，2-3小时出结果

③检测结果可定量

④操作简便

综上，支原体qPCR检测试剂盒比较合适的选择。

德国MB支原体qPCR检测试剂盒：

Venor®Gem qEP

产品特点：

①经典法qPCR试剂盒遵循欧洲药典流程要求

②高特异性，一次检测即可涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种（涵盖欧洲药典规定的9种支原体），根据序列一致性，至少可以检测到107种支原体物种。操作简单，易于观察。

③高灵敏度，MB公司的支原体qPCR检测试剂盒经典法检测限可达到≤10CFU/ml。

④MB公司有相应配套的10CFU/100CFU的敏感度测试的标准品，便于方法学验证。

⑤MB公司有相应配套的支原体基因组DNA和细菌基因组DNA，便于特异性验证。

⑥MB公司有相应配套的支原体绝对定量标准品，便于最后定量检测。

⑦内控对照为独立包装，遵循欧洲药典和日本药典操作流程。