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支原体DNA提取——德国MB Venor GeM Sample preparation Kit使用指南

更新时间:2023-09-29  |  点击率:261

研究表明,37%的细胞培养上清和几乎所有的混合细胞培养上清,都存在抑制PCR的物质。因此,在对细胞或者细胞产物,进行支原体PCR检测前,需要进行DNA提取。


产品名称:支原体DNA抽提试剂盒

英文:Venor®GeM Sample preparation Kit    

品牌:Minerva-Biolabs®    

货号:56-1010

规格:10次/盒    



产品用途

细胞培养基随着时间的延长,可能积聚抑制 PCR 的物质。

已知血清含量大于 12%的培养基 对下游操作(例如 PCR)有抑制作用。而且,培养基中的酚红,对 qPCR 的荧光检测也可能发生交叉反应,产生假阳性。这些弊端可通过支原体 DNA 提取试剂盒来克服 

从细胞培养物和生物药中提取支原体 DNA,和支原体检测试剂盒配套使用。提高支原体检测的灵敏度、一致性和特异性。


作用原理

该试剂盒对支原体DNA的提取,主要由以下四步组成:

1、细胞裂解

2、DNA 吸附到核酸纯化柱上

3、去除残留污染物和抑制剂

4、DNA 洗脱。此方法无须酚/氯仿抽提,只需 30 分钟即可完成制备,提供 PCR所需的 DNA。




使用方法

一、样本要求


支原体 DNA 提取试剂盒可从数量上限为 1X 10^6 细胞/ml,体积上限为 500μl的细胞上清中,直接分离 DNA。 

通常,细胞培养物应尽快进行 DNA 抽提。

在 95℃加热 10 分钟以使之稳定,继而在室温可放 1 周。富含蛋白的样本(蛋白含量>10mg/ml)可能需要蛋白酶 K 处理后,再抽提 DNA(请参照后面的流程)。注意,此试剂盒不适于提取真核细胞组织的 DNA。



二、操作步骤


新试剂盒拆封后,向缓冲液 A1 和缓冲液 A2 加入无水乙醇。将恒温仪设置到 70℃。使缓冲液 E 加热到 70℃。

1、200μl 样本+200μl 调节液,涡旋振荡 10 秒。

2、摇 床 孵 育70℃,10 分钟。

3、加 400μl 吸附缓冲液,涡旋振荡 10 秒。

4、将液体转移到核酸纯化柱,离心10000g,1 分钟,弃掉流过的液体。

5、加500μl缓冲液A1,离心10000g,1 分钟,弃掉流过的液体。

6、加500μl缓冲液A2,离心10000g,1 分钟,弃掉流过的液体。

7、最大速度离心,3 分钟

8、换管。

9、加 60μl 缓冲液E,孵育 2 分钟。

10、离心8000g,2分钟。

11、DNA即可用于PCR。



三、注意事项


👉提供的试剂不能和其他批号的试剂混和。

👉使用的试剂不要超过效期。 

规范操作流程,任何提取流程上的偏差都会影响到结果。 

👉我们推荐使用对照品,以验证结果的可靠性。它也有助于排除故障。 

👉不要使用其他酒精来替代乙醇,它将导致核酸产量的下降。 

👉缓冲液 E 的预热,会很大程度上改善核酸的产量。