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细胞培养指南,这个关键点千万要注意!

更新时间:2023-10-14  |  点击率:296

细胞培养实验是一项基础但十分重要的技术。帮助科研人员再生物学、医学和药物开发等领域,实现探索生物学机理、药物筛选、开发治疗方法等目的,并为基础科学和临床应用提供关键数据,帮助于我们更深入地了解生命过程,推动医学和生物科学领域的进步。

 

在细胞培养实验中,除了可靠的实验方案、严格无菌的环境以及规范合理的实验操作,还有一个关键点,重要但容易被忽视——高品质的实验试剂。“巧妇难为无米之炊",实验试剂选择的好与坏,直接关系到实验结果的成败。其中,胎牛血清作为“细胞粮食"的主要提供者,在细胞培养中扮演着重要的角色。

 

胎牛血清提供对维持细胞指数生长的营养物;提供结合蛋白,来识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调节它们所结合的物质活力;结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用;参与细胞贴壁;提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害;参与细胞冻存。

 

因此细胞实验过程中,需要挑选高品质的胎牛血清,来保障实验能够顺利进行。在选择胎牛血清时,有以下几个注意事项:

 

1、胎牛血清的内毒素含量

在挑选血清时,应关注内毒素含量的高低。内毒素含量高,容易引起细胞衰老、凋亡等情况,品质高的的胎牛血清,内毒素应该是非常低的。因此,内毒素可作为胎牛血清等级评判标准之一,内毒素含量越低的胎牛血清,级别就越高:

内毒素含量≤10EU/ml时,为特级胎牛血清;

内毒素含量﹥10EU/ml≤ 25EU/ml时,为优级胎牛血清;

内毒素含量≥ 25EU/ml时,为标准级胎牛血清。

目前,由于同一厂家,不同批次的血清,内毒素数值也可能有较大差异,因此很多血清厂家在名称上已不注明级别。但使用者仍可通过检测报告,自行甄别挑选。

 

2、胎牛血清的血源

澳洲作为无疫产区,环境更为纯净,抗生素等药物的使用管理也较为严格,因此,澳洲血源的胎牛血清,更受科研人员的偏爱。

合格的胎牛血清通常来自符合当地畜牧部门相关规定的的养殖场和屠宰场,采用非侵入性或较小侵入性的采集方法。这样可以尽可能维持血源的洁净度,减少外部污染物的影响。

 

3、胎牛血清应通过病原相关检测

细胞培养的成功与安全性密切相关,而工艺精良的胎牛血清生产技术,可以在生产层面,避免胎牛血清被各类病原微生物污染。在选择胎牛血清时,科研人员往往无法直接进入生产厂家,了解具体的生产过程,因此,应重点关注检测报告中的“无菌检测"、“病毒检测"“病毒抗体"等相关项目,选择无病原污染的的胎牛血清。

 

以科研人员常用的,Ausbian进口特级胎牛血清为例。该品牌的胎牛血清为澳洲血源,生产过程经过7次无菌过滤,最后3次为0.1μm滤膜无菌过滤。

为了最终验证胎牛血清的无菌性,Ausbian进口特级胎牛血清还经过严格的病原体检测,在供应商提供的检测报告中,涉及有关病毒、细菌、真菌和支原体等,病原体和微生物的筛查检测项目,检测结果均为“未检出",相应病毒的抗体检测各类蛋白也应呈现“未检出"的结果,确保胎牛血清的无菌性。另外,Ausbian进口特级胎牛血清的内毒素含量也非常低,控制在3EU/ml以下,有些批次甚至 ≤ 1EU/mL,让细胞更加健康地生长繁殖。

4、胎牛血清的蛋白含量

总蛋白含量:胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高,可能说明采血的牛龄偏大,不是胎牛;数值偏低,表明血清可能掺入水或者其他溶剂。

血红蛋白含量:标准为不高于20mg/dl

免疫球蛋白:免疫球蛋白的数值能侧面反映出采血的时的牛龄情况,新生牛血清中容易检出IgMIgG的含量也偏高,胎牛血清,不含IgMIgG的含量也较低。

需要注意的是,在检测规范允许的范围内,同一品牌,不同批次的胎牛血清,各类蛋白含量可能略有差异,如果实验中,对某些蛋白有特殊的需求,需要关注胎牛血清的检测报告,对不同批次的血清进行选择。

 

因此尽量选择能提供多批次平行试用的品牌,经过对比筛选,Ausbian进口特级胎牛血清脱颖而出。同时储备多个批次,供使用人员试用,选择更适合自身实验需求的胎牛血清,试用结果满意再进行大批量订购,更加省时省力省心。

 


 

综上所述,在选择胎牛血清时,应重点关注胎牛血清的内毒素含量、血源、无菌及病原检测、蛋白含量等指标,选择更适合自身细胞实验的产品。