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外源核酸诱导的Ago(Crt-SPARTA)系统激活分子机制,PCR-Clean助力科研

更新时间:2023-10-15  |  点击率:276

近日,一项新的研究结果,为新型基因编辑,基因检测技术以及药物研发提供了重要理论支撑。基因编辑技术,需要对遗传物质进行精准的操控,因此需要严格控制实验环境中的核酸污染。德国MB公司生产的核酸污染祛除试剂——PCR Clean,即用型喷雾,可直接喷洒在待清洁物品表面,高效清除核酸污染。

 

Argonaute (Ago)介导RNADNA引导的核酸抑制。虽然真核生物(eAgos)和长原核生物Ago (pAgos)蛋白的机制是已知的,但短pAgos的机制仍然是难以捉摸的。

 

近日,科研人员确定了来自Crenotalea thermophila (Crt)的短pAgo和相关的TIR- apaz蛋白(SPARTA)的低温电镜结构:一个自由状态的rt-SPARTA (3.27 Å),一个装载引导RNA /DNArt-SPARTA (3.27 Å),两个具有不同TIR组织的rt-SPARTA二聚体(3.49 Å3.50 Å),以及一个rt-SPARTA四聚体(3.41 Å)

 

相关研究发表在《Nature》上,文章标题为:“Nucleic acid-triggered NADase activation of a short prokaryotic Argonaute"。

 

该项研究中的结构,揭示了ct - sparta是由连接TIR叶的双叶折叠Ago叶组成的。rt- ago含有MIDPIWI结构域,而rt-TIR- apaz含有TIRN-likeLinkerTrigger结构域。结合的RNA/DNA双链采用b型构象,可被碱基特异性接触识别。核酸结合导致构象变化,因为触发器作为一个障碍,阻止引导RNA 5 ' -和目标DNA 3 ' -末端到达它们的规范口袋,这扰乱了MID结构域并促进了rt- sparta二聚化。两个RNA/ dna负载的rt- sparta二聚体通过它们的TIR结构域形成一个四聚体。四个Crt-TIR组装成两个平行的,头尾相连的TIR组织,表明nadase活性构象。

 

该项研究结果揭示了短pAgos防御入侵核酸的结构基础,并为优化基于sparta的可编程DNA序列检测提供了见解。