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细胞培养支原体抑制剂/清除剂的常规使用方法

更新时间:2023-12-05  |  点击率:232

细胞培养是生物学领域重要的研究工具。支原体污染,是细胞实验过程中常见的微生物污染之一。支原体污染,可直接影响细胞状态,造势实验结果可信度降低、可重复性差等问题。

 

因此,在日常实验过程中,应注重实验室的清洁工作。普通细胞一旦发生支原体污染,建议直接丢弃并对实验环境进行消杀。如果是非常珍贵的细胞,不能随意丢弃,则需要使用支原体抑制剂/清除剂。

 

德国Minerva Biolabs公司生产的支原体清除试剂系列:Zell ShieldMynoxMynox Gold,可高效清除支原体污染。

 

对于费力扩增的细胞(如已转染,或经过体外刺激),如果细胞中发现有支原体污染,但此细胞又不愿丢弃,希望继续培养,推荐使用MB公司生产的复合抗生素Zell Shield

 

(1)在每次使用Zell Shield®之前,细胞传代时,先使用厂家推荐的“悬浮冲洗法"处理好细胞,再使用加了Zell Shield®的培养基养细胞,能达到更好的祛除支原体的效果。

(2)Zell Shield®常规为-18℃保存,建议使用前,先融化分装,仍旧-18℃避光保存,使用时按需融化配制。避免反复冻融。

(3)Zell Shield®按1:100浓度可直接加入培养基。例如:500ml培养基中添加5ml Zell Shield®,50mL/瓶的Zell Shield®可供5L培养基使用。

 

若是无法长期培养的珍贵样本或病毒收获液,则推荐使用德国MB公司的Mynox® ,处理3小时,直接杀除。

 

1)将200μLMynox治疗液于2.8ml培养液(FBS浓度未5%)混合,加入10^4-10^5个细胞。孵育2-3小时。

2)终止治疗,为细胞换液。

3)使用原有正常培养液,传代3-4次(FBS恢复至原有浓度)。

4)取样,PCR检测,鉴定支原体是否清除干净。

 

非常珍贵的细胞或不易获得的生物样本,被支原体污染了,但需要挽救,不能丢弃, 例如:比较珍贵的细胞种子。可采用支原体清除法。若是可以培养超过一个月的细胞,则推荐使用德国MB公司的Mynox® Gold,直接杀除+巩固防护两步处理。

 

1)将500μL初次治疗液与含5%FBS4.5ml培养液,于离心管中混合均匀。

2)将配制好的治疗液培养基转移至培养瓶或培养皿中。

3)加入10^4-10^5个细胞。

4)培养细胞至80%-90%汇合度。

5)细胞传代,将需要传代的细胞、巩固治疗液、9.5ml原有培养基混合均匀后,转移至培养瓶或者培养皿中。

6)重复(4)(52次后,再次传代,不添加Mynox Gold

7取样,PCR检测,鉴定支原体是否清除干净。