细胞培养支原体抑制剂/清除剂的常规使用方法

细胞培养是生物学领域重要的研究工具。支原体污染，是细胞实验过程中常见的微生物污染之一。支原体污染，可直接影响细胞状态，造势实验结果可信度降低、可重复性差等问题。

因此，在日常实验过程中，应注重实验室的清洁工作。普通细胞一旦发生支原体污染，建议直接丢弃并对实验环境进行消杀。如果是非常珍贵的细胞，不能随意丢弃，则需要使用支原体抑制剂/清除剂。

德国Minerva Biolabs公司生产的支原体清除试剂系列：Zell Shield、Mynox、Mynox Gold，可高效清除支原体污染。

对于费力扩增的细胞（如已转染，或经过体外刺激），如果细胞中发现有支原体污染，但此细胞又不愿丢弃，希望继续培养，推荐使用MB公司生产的复合抗生素Zell Shield。

（1）在每次使用Zell Shield®之前，细胞传代时，先使用厂家推荐的“悬浮冲洗法"处理好细胞，再使用加了Zell Shield®的培养基养细胞，能达到更好的祛除支原体的效果。

（2）Zell Shield®常规为-18℃保存，建议使用前，先融化分装，仍旧-18℃避光保存，使用时按需融化配制。避免反复冻融。

（3）Zell Shield®按1:100浓度可直接加入培养基。例如：500ml培养基中添加5ml Zell Shield®，50mL/瓶的Zell Shield®可供5L培养基使用。

若是无法长期培养的珍贵样本或病毒收获液，则推荐使用德国MB公司的Mynox® ，处理3小时，直接杀除。

（1）将200μLMynox治疗液于2.8ml培养液（FBS浓度未5%）混合，加入10^4-10^5个细胞。孵育2-3小时。

（2）终止治疗，为细胞换液。

（3）使用原有正常培养液，传代3-4次（FBS恢复至原有浓度）。

（4）取样，PCR检测，鉴定支原体是否清除干净。

非常珍贵的细胞或不易获得的生物样本，被支原体污染了，但需要挽救，不能丢弃， 例如：比较珍贵的细胞种子。可采用支原体清除法。若是可以培养超过一个月的细胞，则推荐使用德国MB公司的Mynox® Gold，直接杀除+巩固防护两步处理。

（1）将500μL初次治疗液与含5%FBS的4.5ml培养液，于离心管中混合均匀。

（2）将配制好的治疗液培养基转移至培养瓶或培养皿中。

（3）加入10^4-10^5个细胞。

（4）培养细胞至80%-90%汇合度。

（5）细胞传代，将需要传代的细胞、巩固治疗液、9.5ml原有培养基混合均匀后，转移至培养瓶或者培养皿中。

（6）重复（4）（5）2次后，再次传代，不添加Mynox Gold。

（7）取样，PCR检测，鉴定支原体是否清除干净。