当前位置:首页  >  技术文章  >  如何从样品预处理角度,提高支原体检测的准确性

如何从样品预处理角度,提高支原体检测的准确性

更新时间:2024-03-27  |  点击率:222

支原体放行检测,在临床相关的项目中发挥着重要作用。常见的一些研究,如干细胞治疗项目、免疫细胞治疗项目研究、CAR-T项目研究、抗体药研究、疫苗等领域,以及还有一些重要的细胞培养、细胞典藏项目,都需要对培养的细胞或收获的产物,进行准确度较高的支原体检测,以保证产物没有支原体污染。

 

qPCR法是十分常用的支原体检测方法。药典中指出,通过方法学验证,即在检测限、特异性和耐用性等方面达到要求后,才能替代传统的检查方法。因此,qPCR实验的结果的稳定性与精准度,直接关系到方法学验证是否可信。

 

除了实验操作、所选择的试剂盒等常见的影响因素,待检样品的预处理方法,也会对qPCR检测结果造成不同程度的影响。

 

用于支原体检测的样品的成分通常比较复杂,可能存在抑制PCR的物质,影响qPCR实验的结果。在进行qPCR检测之前,需要将样品中的支原体DNA纯化出来,以确保检测的准确性和灵敏度。

 

进行DNA提取的优势:

1、提高检测的准确性:DNA提取可以有效地从复杂样品中分离出支原体的DNA,避免杂质对检测结果的干扰,从而提高检测的准确性,降低假阳性结果的可能性。

2、增加检测的灵敏度:通过DNA提取,可以将支原体的DNA浓缩到较高的水平,使其在qPCR中的检测限度更低,提高了检测的灵敏度,即能够检测到更低浓度的支原体。

3、节省成本:虽然DNA提取可能需要一定的时间和成本,但它可以避免由于假阳性结果而带来的额外成本,如错误的结果导致方法学验证失败等。

 

因此,当待检样品如果存在以下几种情况(包括但不限于),需要对样品进行DNA提取处理,以提高支原体检测的灵敏度:

1、细胞培养基中的血清浓度如果超过12%,那么对下游的PCR反应会产生抑制。酚红,对荧光定量PCR的检测也会干扰。这些均可以通过使用德国Miverva Biolabs公司的支原体DNA提取试剂盒来解决。

2、对于样品类型是细胞团、疫苗、冻存细胞和石蜡包埋的组织,需要提前提取DNA

3、如果样品中蛋白含量高于10mg/ml,则先需要用蛋白酶K进行处理,再用原体DNA提取试剂盒提取样品中的DNA

 

德国Minerva Biolabs公司生产的Venor®GeM Sample preparation Kit支原体DNA提取试剂盒,可实现支原体检测方法验证过程中的样品制备步骤,包括DNA提取和纯化,可防止可能干扰qPCR扩增的污染物或抑制剂的引入。从细胞上清和生物制品中分离支原体DNA,全程只需30分钟。该试剂盒的操作分四步:细胞溶解,DNA特异性与层析柱结合,祛除残留的污染物和抑制剂,洗脱DNA

 

该试剂盒符合欧洲药典规范,配合支原体qPCR检测试剂盒、支原体标准品一起使用,通过欧洲药典的方法学验证,助力新药上市。