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如何高效清除细胞中的支原体污染?

更新时间:2024-07-06  |  点击率:222

在细胞培养过程中,支原体污染是一个常见且棘手的问题。支原体是一种介于细菌和病毒之间的原核生物,形态多样,没有细胞壁,且能够直接穿过常规的除菌滤膜,因此极易造成细胞培养污染。支原体污染不仅会影响细胞的正常生长和代谢,还可能改变细胞的基因表达,干扰实验结果,甚至导致实验失败。

 

一般情况下,细胞感染支原体,我们建议直接丢弃并对环境进行消毒处理,但总有一些特殊情况,导致我们不能丢弃辛苦培养的细胞,这时就可以派细胞用支原体祛除试剂上场了。

 

1、对于已发生支原体污染的细胞,不愿随意丢弃,希望继续培养时,可选择Zell Shield®细胞支原体祛除试剂(货号:13-0050/13-0150)。

 

如已转染或大量扩增的细胞等情况,需要对已被支原体污染的细胞进行拯救。使用含有复合抗生素成分的Zell Shield®细胞支原体祛除试剂,可以抑制支原体蛋白和DNA合成,同时对细菌和真菌也有抑制作用。

 

先使用厂家推荐的“悬浮冲洗法"处理好细胞,再使用加了Zell Shield®细胞支原体祛除试剂的培养基养细胞,按照使用说明进行操作,使用Zell Shield®细胞支原体祛除试剂培养4代后,细胞中的支原体即可祛除。

 

悬浮冲洗法及试剂使用方法:

1)消化细胞:将培养瓶或培养皿中的细胞消化下来。

2离心:将消化好的细胞寄培养液转移至离心管中,进行常规离心。

3清洗细胞:弃上清后,用无菌PBS轻柔吹打清洗细胞。

4)重复清洗:将PBS和细胞的混合物进行低速离心,弃上清并重复清洗3.

5)重新培养:最后一次清洗结束后,弃掉PBS上清液,加入含有Zell Shield®细胞支原体祛除试剂的新鲜培养基进行培养,4代后,细胞中的支原体即可祛除。

 

 

2、对于无法长期培养的珍贵样本或病毒收获液,则可以使用德国MB公司的Mynox®珍贵生物样品支原体清除试剂(货号: 10-0200/ 10-0500/ 10-1000)。

 

该试剂含有「治疗液」和「巩固防护液」。「治疗液」来自枯草杆菌提取物,可特异性地与支原体膜结合,改变支原体膜通透性,从而使支原体在2-3小时内破溃死亡;「巩固防护液」加入培养基,后续培养一个月,细胞将会清除支原体的污染,确切有效。

 

使用方法:

1)细胞重新传代时,用含Mynox®珍贵生物样品支原体清除试剂、5%FBS的的培养基替换原有培养基,对细胞进行培养。

2)孵育培养2-3小时。

3)对细胞进行换液。

4)用不含Mynox®的正常培养基(原始培养条件)对细胞进行培养,传代3-4次。

5)可对细胞进行支原体检测,观察细胞状态。

 


 

3、对于可以培养超过一个月的珍贵细胞株,如果需要对其进行祛除支原体的处理,可以使用德国MB公司的Mynox® Gold珍贵细胞株支原体清除试剂(货号:10-0201/ 10-0501/ 10-1001)。

 

该试剂分为直接杀除+巩固防护两步处理,祛除支原体的同时,可进一步在后续培养中巩固清除效果,防止支原体卷土重来"

 

使用方法:

1)治疗液与含5%FBS的培养及混合

2)将混合后的治疗液添加至培养皿中

3)将接种细胞

4)培养细胞至80%-90%汇合后,进行传代

5)传代的同时加入巩固液

重复(4)(5)两次

6)在无Mynox® Gold的情况下传代

7)用Venor® Gem支原体检测试剂盒检测