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发现细胞支原体污染,要做哪些事情能预防?

更新时间:2024-10-09  |  点击率:54
细胞支原体污染是指在细胞培养过程中,由于外界环境、操作不当等原因,导致支原体等微生物侵入细胞内部,影响细胞的生长和繁殖。支原体是一种无细胞壁的微生物,具有较强的抗药性和易感性,容易在细胞培养过程中引起污染。因此,在进行细胞培养时,需要严格控制操作过程,防止支原体污染的发生。  
一、细胞支原体污染的原因  
外界环境:支原体广泛存在于自然界中,如土壤、水源、空气等。当细胞培养过程中使用的试剂、培养基、器械等受到支原体污染时,可能导致细胞支原体污染。  
操作不当:细胞培养过程中,操作人员的手、衣物、器械等可能带有支原体。如果操作不当,如未进行严格的手部消毒、未使用无菌器械等,可能导致支原体污染。  
培养条件:支原体在适宜的温度、湿度等条件下容易生长繁殖。如果细胞培养条件不适宜,如温度过高、湿度过大等,可能导致支原体污染。  
细胞来源:部分细胞来源可能已经受到支原体污染。如果使用这些受污染的细胞进行培养,可能导致支原体污染。  
二、检测方法  
形态学检测:通过显微镜观察细胞形态,发现异常的细胞形态,如肿胀、变形、脱落等,可能是支原体污染的表现。  
生化检测:通过检测细胞培养上清液中的代谢产物,如乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)等,判断是否存在支原体污染。  
PCR检测:通过PCR技术检测细胞培养上清液或细胞内的支原体DNA,以确定是否存在支原体污染。  
免疫学检测:通过免疫荧光、ELISA等方法检测细胞培养上清液或细胞内的支原体抗原,以确定是否存在支原体污染。  
三、细胞支原体污染的预防措施  
严格控制操作过程:操作人员应进行严格的手部消毒,使用无菌器械和培养皿,避免交叉污染。  
使用无菌试剂和培养基:确保使用的试剂和培养基未受到支原体污染,可进行无菌处理或使用一次性产品。  
优化培养条件:保持适宜的温度、湿度等条件,避免细胞过度生长或死亡,降低支原体生长的机会。  
选择优质细胞来源:尽量选择经过严格筛选的优质细胞来源,降低支原体污染的风险。  
四、处理措施  
更换培养基:发现后,应立即更换新的无菌培养基,避免支原体继续生长繁殖。  
使用抗生素:根据支原体的敏感性选择合适的抗生素进行治疗,如红霉素、四环素等。但需注意抗生素可能对细胞产生毒性作用,需谨慎使用。  
清除受污染的细胞:对于严重受污染的细胞,可使用胰酶消化法或机械刮除法清除受污染的细胞。  
重复检测:处理后需重新进行支原体检测,确保污染已得到有效控制。