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支原体污染细胞的检测方法及防治措施

更新时间:2025-01-15  |  点击率:41
  支原体污染细胞是细胞培养和生物实验中常见的一个问题。支原体(Mycoplasma)是一类非常小的原核生物,因其没有细胞壁,结构简单,容易在细胞培养环境中生长和繁殖,且通常不易被常规的细胞培养检测方法察觉。支原体污染不仅会影响细胞的生长和功能,还可能导致实验结果的偏差,甚至影响实验的重现性。为了保证细胞培养的质量和实验结果的可靠性,了解支原体的特性、污染机制及其防治方法是非常重要的。
 

 

  支原体污染细胞的检测方法:
  1.显微镜检查法:利用染色法(如DAPI染色法)和荧光显微镜观察细胞中是否存在支原体。这种方法可以直接观察到支原体的存在,但灵敏度较低,且不适用于大规模筛查。
  2.培养法:将培养物接种于特殊的培养基上,进行培养观察。如果支原体存在,它们会在培养基中生长,并在几天内形成典型的菌落。这种方法对需要高灵敏度的检测较为有效,但周期长,且操作复杂。
  3.PCR检测法:通过PCR扩增支原体基因序列,如16SrRNA基因,可以敏感且快速地检测支原体污染。这是目前常用的支原体检测方法,具有较高的灵敏度和特异性。
  4.酶联免疫吸附法(ELISA):该方法通过检测支原体产生的特异性抗原或抗体进行检测,虽然灵敏度较高,但仍不如PCR方法广泛应用。
  5.免疫荧光法:利用特异性的抗支原体抗体进行免疫荧光标记,可以在细胞培养物中检测到支原体。
  支原体污染细胞的防治措施:
  1.严格的无菌操作:培养过程中必须严格执行无菌操作,减少污染源。使用无菌的培养基、试剂以及灭菌处理过的实验工具,避免交叉污染。
  2.定期检测细胞:细胞培养的定期检测是确保无支原体污染的有效方法。尤其是在长期培养的细胞系中,应定期进行支原体检测。
  3.培养环境的控制:保持细胞培养室的清洁,定期消毒并保证通风良好,减少空气中细菌和支原体的传播。
  4.使用抗支原体药物:有些实验室在细胞培养中会加入一些抗支原体药物,如金霉素、磺胺类药物等,以防止支原体污染。然而,这些药物不能全杜绝支原体污染,只能减缓其增长,且长期使用可能对细胞有不良影响。
  5.更换污染细胞系:一旦发现支原体污染,应该立即将受污染的细胞系隔离并处理掉,避免污染扩散。对于已经被污染的细胞,常常需要清除并重新从没有污染的来源建立细胞系。