培养细胞时融化胎牛血清的注意事项

胎牛血清（FBS）是细胞培养中常用的营养添加剂，其品质与处理方式直接影响细胞生长状态。正确的融化流程可避免血清中蛋白质变性、降低沉淀风险，并减少微生物污染机会。以下从温度、时间、混匀、分装与保存五个方面，总结实验室常用且验证有效的操作要点。

一、温度控制：宁慢勿快

1.       预设解冻：实验前一日傍晚将FBS从-20 °C移至4 °C冰箱，过夜（8-12 h）缓慢解冻，可最大限度减少脂质与脂蛋白析出。

2.       水浴补足：次日将已半解冻的血清置于25 °C水浴，水位不超过瓶肩，轻轻晃动每2-3 min，缩短解冻时间；禁止37 °C长时间浸泡，防止生长因子活性下降。

3.       禁用热冲击：不可直接放入37 °C水浴或手握加热，快速升温会使球蛋白纤维析出，形成白色颗粒，影响后续细胞贴壁。

二、时间把握：2 h内完成

整个融化过程建议≤2 h。超过4 h，血清中糖、氨基酸浓度梯度易诱发微生物繁殖；若临时中断，应将瓶子重新放回4 °C并在6 h内继续处理。

三、混匀技巧：轻摇勿起泡

1.       倒置法：将瓶子轻轻颠倒5-6次，使上下液体均匀，避免剧烈摇晃产生气泡；气泡可增加蛋白质氧化几率。

2.       旋转法：若瓶口已开启，可用移液管缓慢吹打底层3-4次，忌用涡旋振荡器。

四、分装策略：一次用量，即刻封口

1.       预冷移液管：将50 mL移液管先置于4 °C，减少温度差异引起的蛋白凝集。

2.       规格选择：按日常接种量分装（15 mL、30 mL、50 mL），每管留<10 %顶空，-20 °C竖直存放，避免反复冻融。

3.       标识规范：写明批号、日期、操作人，先进先出，记录可追溯到每批细胞。

五、保存与使用细节

1.       避光：棕色袋或铝箔纸包裹，防止核黄素等光敏成分分解。

2.       温度监控：-20 °C普通冰箱保存≤6个月；-80 °C可延长至12个月，但需先分装小体积，防止整瓶反复升温。

3.       解冻即用：分装后FBS融化后不再回冻，24 h内用完；若剩余>2 mL，可暂放4 °C，48 h内消耗完毕。

4.       无菌检查：每批取50 μL涂布LB平板，37 °C过夜，确认无杂菌生长后方可加入培养体系。

六、常见误区与纠正

·         误区1：室温放置半天再补水浴
→ 纠正：室温>6 h会显著升高微生物风险，应4 °C过渡。

·         误区2：融化后继续水浴保温
→ 纠正：长时间25 °C以上水浴易使热敏感蛋白失活，应立即分装或冷藏。

·         误区3：直接用原瓶反复倒取
→ 纠正：整瓶多次升温-冷却会造成批内差异，应先分装再使用。

七、小结

遵循"4 °C预解冻-25 °C水浴补足-轻混匀-即时分装-避光保存"五步流程，可保持胎牛血清的批间一致性，减少沉淀和污染，为细胞提供稳定、营养丰富的生长环境。把细节做成习惯，实验成功率自然水涨船高。祝您细胞状态天天在线，实验顺利！