细胞培养中常见污染类型及防控要点

在长期细胞培养实操中，污染是影响实验稳定性的常见问题，一旦发生不仅会导致细胞状态异常、实验数据偏差，还可能浪费大量时间与试剂，因此提前了解污染类型、掌握基础防控逻辑十分关键。结合日常实验经验，以下梳理几种高频污染情况及对应的注意事项，供各位同行参考。

一、细菌污染

细菌污染多由操作环境不洁、试剂污染或耗材灭菌不彻di引发，污染初期可能无明显直观变化，随着细菌大量增殖，培养基会快速出现浑浊，常见呈淡黄色或乳白色浑浊状态，部分细菌代谢会产生异味，显微镜下可观察到大量微小点状颗粒，伴随布朗运动，严重时会导致细胞贴壁能力下降、形态皱缩直至死亡。

防控核心在于把控“无菌环节"：实验前需对超净工作台进行充分紫外消毒，操作时佩戴无菌手套并避免手部接触耗材无菌区域；培养基、血清等试剂使用前需检查是否存在浑浊、沉淀等异常，开封后规范储存并在有效期内用完；实验耗材需选用合格灭菌产品，使用前确认包装完好无破损。

二、真菌污染

真菌污染常见于环境湿度较高的场景，污染初期不易察觉，多以少量白色、黄色或绿色霉斑形式附着在培养基表面或培养瓶内壁，后期霉斑会逐渐扩大，菌丝可能蔓延至整个培养体系，培养基虽可能保持澄清，但真菌代谢产物会抑制细胞生长，导致细胞增殖缓慢、形态异常。

防控需兼顾环境与操作：定期对细胞培养箱进行清洁消毒，控制箱内湿度，避免培养瓶瓶口长期敞开；实验后及时清理操作台残留试剂，防止污染物滋生；若发现少量真菌污染，需立即将污染样品密封处理，避免交叉污染，同时对周边培养物进行排查，必要时对培养环境全面消毒。

三、支原体污染

支原体污染是细胞培养中隐蔽性较强的类型，支原体体积微小，普通光学显微镜下难以直接观察，污染后培养基通常无明显浑浊变化，仅表现为细胞生长状态逐渐变差，如增殖速率下降、形态不规则、贴壁松散，长期污染会导致细胞生物学特性改变，直接影响实验结果准确性，需通过专门检测手段才能确认。

防控需注重“源头把控"：优先选用无支原体污染的细胞株，引入新细胞时需进行支原体检测，确认合格后再扩大培养；血清作为细胞培养常用试剂，其质量与支原体污染风险相关，需选用质控严格的血清产品，降低污染概率；实验过程中避免不同细胞株交叉使用耗材，定期对培养环境及常用试剂进行支原体筛查。

四、操作相关污染

除微生物污染外，操作不当引发的“非微生物污染"也需警惕，例如操作时引入的细胞外杂质、不同细胞株之间的交叉污染等。交叉污染会导致实验用细胞纯度下降，出现杂细胞混存现象，直接影响实验数据的可靠性；而杂质引入可能干扰细胞生长微环境，导致细胞状态波动。

这类污染的防控重点在于规范操作流程：不同细胞株培养需单独使用耗材，实验时做好样品标记，避免混淆；操作过程中动作轻柔，避免试剂溅出或耗材破损导致杂质混入；传代、换液等操作需严格遵循无菌规范，减少人为因素引发的污染风险。

细胞培养的污染防控核心的是“细节把控"，从环境消毒、试剂选用到操作规范，每个环节都需严谨对待，同时定期观察细胞生长状态，做到早发现、早处理，才能大程度保障细胞培养的稳定性，为实验顺利开展奠定基础。