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Biocoll细胞分离液操作步骤及注意事项详解

更新时间:2020-10-26  |  点击率:1141
   如何从血液中获取单个核细胞呢?PBMC简单常用的方法是利用密度梯度介质进行分离,利用密度与淋巴细胞相近且近于等渗的Biocoll细胞分离液进行分离,其成分是高分子的聚蔗糖和泛影酸钠。
  Biocoll细胞分离液操作步骤及注意:
  1、取全血,使用等量PBS稀释。(全血:HBSS=1:1)
  2、取离心管,加入与血稀释液等量的PBS于管底,将血液稀释液小心加至PBS液面上层。(小心不要使两种溶液混合,吸头接近液面,贴壁缓慢加入,尤其是两种溶液刚接触到的时候,一定要慢!慢!再慢!)
  3、离心:800g,30min,需要将制动降至低,即离心机自然降速至0,离心完毕将得到如图所示分层(一定要自然降速,或者只有1-2成的制动)
  4、吸取白膜层至新15mL离心管中。(白膜层为如图所示部位,一定要小心的吸取,不要吸到血浆和下层的Biocoll细胞分离液也不要将各层溶液搅混,吸取的时候可以先将上层血浆吸掉,这样更好操作。)
  5、白膜层液体加10~15mlPBS离心,300g,10min,弃上清。沉淀再加PBS清洗一次,弃上清。
  6、沉淀加入正常培养的*培养基进行培养,2~3小时,使单核细胞贴壁。
  7、镜下观察细胞贴壁后,更换培养基,去除未贴壁细胞,保留下来的即为所需的单核细胞。