Biocoll细胞分离液操作步骤及注意事项详解

更新时间：2020-10-26 | 点击率：1251

　　如何从血液中获取单个核细胞呢？PBMC简单常用的方法是利用密度梯度介质进行分离，利用密度与淋巴细胞相近且近于等渗的Biocoll细胞分离液进行分离，其成分是高分子的聚蔗糖和泛影酸钠。

　　Biocoll细胞分离液操作步骤及注意：

　　1、取全血，使用等量PBS稀释。（全血：HBSS=1:1）

　　2、取离心管，加入与血稀释液等量的PBS于管底，将血液稀释液小心加至PBS液面上层。（小心不要使两种溶液混合，吸头接近液面，贴壁缓慢加入，尤其是两种溶液刚接触到的时候，一定要慢！慢！再慢！）

　　3、离心：800g，30min，需要将制动降至低，即离心机自然降速至0，离心完毕将得到如图所示分层（一定要自然降速，或者只有1-2成的制动）

　　4、吸取白膜层至新15mL离心管中。（白膜层为如图所示部位，一定要小心的吸取，不要吸到血浆和下层的Biocoll细胞分离液也不要将各层溶液搅混，吸取的时候可以先将上层血浆吸掉，这样更好操作。）

　　5、白膜层液体加10~15mlPBS离心，300g，10min，弃上清。沉淀再加PBS清洗一次，弃上清。

　　6、沉淀加入正常培养的*培养基进行培养，2~3小时，使单核细胞贴壁。

　　7、镜下观察细胞贴壁后，更换培养基，去除未贴壁细胞，保留下来的即为所需的单核细胞。　