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RNA提取试剂盒操作的详细步骤

更新时间:2023-05-26  |  点击率:622
  RNA提取试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因组,不适合于细胞等组织内RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组RNA可用于RT-PCR实验。
  RNA提取试剂盒操作步骤
  使用前请先在漂洗液中加入一瓶新开启的无水乙醇,加入到离瓶口约0.5-1cm距离,盖好摇匀。所有离心步骤均在2-8条件下进行。
  1、取病毒上清液0.5ml,12000rpm离心5min,尽量吸尽上清使用,弃去沉淀(如无沉淀可省去此步)。
  2、向病毒上清中加入20ul10mg/ml的蛋白酶K,充分混匀,65消化10min,期间可颠倒离心管混匀数次。
  3、吸附柱前处理:从包装中取出吸附柱,放入收集管中,加入700ul洗柱液,室温放置2分钟,2-812000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中待用。
  4、向病毒上清中加入500ul结合液,充分混匀。再向管中加入400ul无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响RNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,静置2min。(吸附柱的最大容积为750ul,可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。)
  5、12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
  6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
  7、向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
  8、12000rpm离心2min,将吸附柱置于室温或50温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
  9、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50ul-100ul经65水浴预热的RNasefreeddH2O,室温放置5min,12000rpm离心2min。即可得到高质量的病毒基因组RNA。