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原代细胞培养,这个关键点一定要牢记!

更新时间:2023-06-04  |  点击率:436

原代细胞是一类细胞的统称,具体是指从来源于活体组织,通过特定的分离方法制备得来的比较原始的一类细胞。体外培养原代细胞是现代生命科学研究生物中,十分重要的实验手段之一。通过原代细胞的体外培养,使科研人员能在体外观察并研究原始细胞的特性和行为。

原代细胞培养如此重要,但培养起来却苦难重重。容易污染、成活率低等问题都困扰着科研人员。

 

本文将介绍一般的原代细胞培养步骤,以及一些常见的培养技巧和注意事项。

 

第一部分:准备工作

在进行原代细胞培养之前,我们需要准备以下实验室设备和试剂:

 

无菌操作台和培养箱:用于提供无菌环境,以防止细胞污染。

培养皿和培养瓶:用于细胞的培养和扩增。

培养基和培养液:包含必要的营养物质和生长因子,为细胞提供适宜的生长环境。

显微镜:用于观察和评估细胞生长情况。

第二部分:原代细胞的分离与培养

 

组织收集:从动物或人体中取得待培养的组织,如肺、肾、皮肤等。确保收集过程无菌,并尽量迅速进行下一步操作。

细胞分离:将组织切割成小块,并用酶消化液(如胰蛋白酶、胶原酶等)进行细胞的分离。注意避免酶消化时间过长,以免对细胞产生损伤。

细胞收获:过滤酶消化液,将细胞悬浮液离心分离细胞。去除上清液,用适当的培养基悬浮细胞。

细胞培养:将细胞悬浮液均匀分布在无菌培养皿或培养瓶中,加入适当的培养基。确保培养皿或培养瓶的表面干净,并避免细胞过度密集。

细胞培养条件:将培养皿或培养瓶放置于恒温培养箱中,温度通常为37摄氏度。同时,保持培养基的稳定性和合适的湿度。

 

第三部分:培养技巧与注意事项

 

避免细胞污染:在操作过程中,务必保持无菌操作,使用无菌试剂和器具,并经常对培养环境进行消毒。定期检查细胞培养是否受到细菌、真菌或其他污染物的污染。

培养基的更换:定期更换培养基,以提供新鲜的营养物质和细胞生长因子。根据细胞类型的需求,可以选择使用不同的培养基和添加剂。

细胞传代:当细胞达到合适的密度时,可以进行细胞传代,将细胞移植到新的培养皿或培养瓶中。注意传代过程中的细胞数目和均匀性。

细胞凋亡与分化:在长期培养过程中,一些原代细胞可能会发生凋亡或分化。根据研究需要,可以添加适当的因子或改变培养条件来控制细胞的凋亡和分化。

 

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