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盘点各国药典中的『支原体NAT检测法』,德国MB支原体检测助力科研

更新时间:2023-07-24  |  点击率:422

近年来,随着生物医药领域的迅猛发展,细胞治疗等项目成为了生物医药领域的热点。与此同时,各国法规和相关机构也在逐步加强对生物制品安全性和可靠性的监管。其中一个关键问题是“如何确保生物制品在生产过程中没有支原体污染"。针对涉及细胞培养的生物制品工艺过程,各国法规均相关的检测要求。

传统的培养法和指示细胞法是各国《药典》中都认可的支原体检测方法。但是这两种相对“古早"的检测手段,有难以避免的缺点:培养法检测周期长、指示细胞法灵敏度低。导致生物医药相关企业,在生产或产品放行过程中,出现周期拉长的情况。行业内部对支原体检测时效性和灵敏度要求越来越高,因此NAT方法从众多支原体检测方法中脱颖而出。

目前《欧洲药典》(EP)<2.6.7>,《日本药典》(JP)以及《美国药典》(USP)<63>都已收录NAT方法作为支原体检测方法,但需要对该方法进行方法学验证,与传统方法进行对比,对比项目包括特异性、检测灵敏度等指标,要求NAT法结果不低于传统方法,才可以使用。2020版《中国药》典(ChP)虽然并未收录NAT法作为支原体检测方法,但其中也提到了“也可采用经国家药品检定机构认可的其他方法"。

不同药典在特异性(Specificity)、检测限(Detection Limit)和耐用性(Robustness)三方面进行了要求。

特异性

特异性指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下,采用的检测和分析方法能正确测定出待检物种的能力。《欧洲药典》中提到,“需要在验证中关注与系统发育关系比较近的其他细菌种属之间的交叉反应,如革兰氏阳性菌包括梭菌属Clostridium、乳杆菌属Lactobacillus和链球菌属Streptococcus。"

检测限

检测限是指样品中被测物能被检测出的限度。

对需要进行检测限确认的支原体类型,试剂盒厂家需尽可能多的覆盖法规药典中要求的支原体类型。

耐用性

耐用性系是指,检测条件有小的变动时,检测结果不受影响的承受程度。比如,抑制物质实验可检测实验的耐用性。


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支原体DNA提取试剂盒,符合欧洲药典的要求,从细胞上清和生物制品中,均可分离支原体DNA,全程只需30分钟。洗脱DNA纯度高,体积50μl,保证PCR的灵敏。


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经典法支原体qPCR试剂盒遵循欧洲药典流程要求;高特异性,一次检测即可涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种(涵盖欧洲药典规定的9种支原体),根据序列一致性,至少可以检测到10^7种支原体物种。操作简单,易于观察。


支原体标准品

涵盖支原体灵敏度保准品(检测限和耐用性验证)、支原体特异性标准品(特异性)和支原体绝对定量标准品(定量检测)三大类。