有证据了！研究揭示『支原体污染』对细胞实验的影响

支原体污染

细胞实验是生命科学研究中重要的工具，它们为科学家提供了深入了解细胞行为、分子机制以及疾病发展的机会。

细胞实验的可靠性和可重复性是科学研究的基石。支原体污染是阻碍实验结果准确和可靠的原因之一。支原体是一类细小的微生物，它们可以感染人类和动物细胞，对细胞实验的结果产生严重影响，引发了广泛的关注。

本期内容，来讲讲细胞实验中，已报道过的支原体危害。

影响细胞脂类代谢

研究人员以不同浓度的肺炎支原体处理人肺癌上皮细胞，不同时间后提取胞膜及表面的鞘脂类，应用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱一 进行分析应用RT-PCR和免疫荧光方法，检测鞘脂类代谢通路中两个关键酶的变化。

实验结果：

肺炎支原体和细胞大多数鞘脂类组成成分相同；感染能影响细胞的鞘脂类代谢，包括诱导新种类的神经酞胺的生成， 升高或降低某些神经酞胺的浓度，在一定浓度和时间点能诱导酸性鞘磷脂酶的聚簇和丝氨酸棕搁酞转移酶的变化。

对黑色素瘤细胞的影响

在研究早期传代黑色素瘤细胞系中的干细胞样特性时，研究人员注意到感染了猪鼻支原体的细胞系的实验组的可重复性差。

研究人员用支原体感染其他黑色素瘤细胞系.研究发现，支原体感染在培养中会产生多形性效应，从细胞凋亡到增强的致瘤性和侵袭性，并且会造成相当大的资源浪费和实验结果解释的混乱[2]。

诱导细胞产生炎症因子

在一项研究中，研究人员利用肺炎支原体感染A549细胞。

研究发现发现，肺炎支原体能刺激A549细胞分泌TNF-α, 其产生水平与刺激时间具有量的正相关性；肺炎支原体还能刺激A549细胞分泌IL-8, 其产生水平与刺激时间亦具有量的正相关性。而被支原体感染的A549细胞分泌TNF-α和IL-8可能与NF-κB的激活有关。

诱导细胞氧化应激

在这项研究中，研究人员利用多巴胺能神经元细胞系(BE-M17)，使用单细胞凝胶电泳(彗星试验)，来评估支原体感染对基因组不稳定性和碱基切除修复(BER)活性的影响。

结果表明，与未感染的细胞相比，支原体感染在没有炎症反应的情况下诱导氧化应激，DNA损伤水平(链断裂/碱不稳定位点(SB/ALS)和氧化嘌呤)显著增加。未感染细胞修复SB/ALS的速度比感染细胞更快。未感染的细胞在24小时内就能修复氧化嘌呤，而感染的细胞在30小时后也不能修复。

总之，本研究表明，支原体感染不仅会诱导氧化应激和DNA损伤，而且还会降低负责氧化损伤DNA修复的主要途径，即BER的效率

[1]郁园园. 肺炎支原体感染干扰人肺癌上皮细胞A549的脂类代谢[D],2008.

[2]Ji Y, Karbaschi M, Cooke MS. Mycoplasma infection of cultured cells induces oxidative stress and attenuates cellular base excision repair activity. Mutat Res Genet Toxicol Environ Mutagen. 2019;845:403054. doi:10.1016/j.mrgentox.2019.05.010

[3]肺炎支原体诱导A549细胞分泌肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-8的相关性[J],2009,30(02):188-190+194.

预防实验室中的支原体污染

由于支原体感染细胞，会带来一系列难以预测的生理生化反应，影响实验结果，因此，在日常的实验中，要注意预防支原体污染的发生。

除了常规的实验室清洁外，建议使用专业的支原体清除、预防试剂——德国Minerva Biolabs公司的支原体祛除喷雾剂：Mycoplasma-off™，水槽支原体预防试剂：Water Shield™。 

Mycoplasma-off™

Mycoplasma-off™特点：

（1）快速有效

Mycoplasma-off™支原体祛除喷雾剂即用型中含有支原体杀除剂Mynox®，可在几分钟内迅速杀除支原体。   

（2）广谱抗菌

不仅能清除并预防支原体，而且能有效祛除葡萄球菌、肠球菌、大肠杆菌、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、牛腹泻病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠诺如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

（3）无腐蚀性和致癌性

乙醇作为溶剂，无腐蚀性和致癌性成分。

（4）操作简便

即用型消毒液，可以快速简单地保持工作区的清洁干净。

Mycoplasma-off™使用方法及步骤：

（1）将Mycoplasma-off™均匀喷于待消毒的洁净台或实验设备和器材的表面。

（2）等待5-10分钟。

（3）用干燥纸巾将已喷过Mycoplasma-off™的洁净台或实验设备和器材的表面搽拭干净。

（4）将已消毒的洁净台通风2-3分钟，或将已消毒的实验设备和器材置于通风处2-3分钟。

（5）将剩余的Mycoplasma-off™喷雾剂置于阴凉通风处保存。

Water Shield™

细胞培养环境中，培养箱水槽，水浴锅经常会有支原体以及各种细菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及时，水槽中的水源即会成为细胞污染的重要来源。

Water Shield™可持续作用四周，预防水源中的支原体、细菌、真菌、霉菌、孢子的污染。

Water Shield™特点：

（1）长效。Water Shield™含表面活性剂、季铵盐和络合剂，不易挥发，可持续作用4周。

（2）安全。不含醛类或叠氮化物，对细胞无毒害。

（3）广谱。预防支原体、细菌、真菌、霉菌、孢子污染。

（4）方便。Water Shield™按1:200比例，直接加入水中，使用方便。

（5）不产生水垢。

Water Shield™使用方法及步骤：

（1）Water Shield™和蒸馏水可直接加入培养箱水槽或水浴锅中。

（2）Water Shield™按1:200比例使用，例如：1000ml蒸馏水+5mlWater Shield™或10L蒸馏水+50mlWater Shield™。

（3）4周左右清洗水槽，换水，重新加入Water Shield™。