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提高细胞培养效率的两个关键点

更新时间:2023-09-25  |  点击率:318

细胞体外培养技术的应用,是人类开启生命奥秘大门的钥匙。该项技术的发展,科学家们能够脱离供体的情况下,在实验室中,研究并分析各种细胞的生命活动。高效的细胞培养来之不易,操作过程的实际情况十分复杂,存在诸多可能会影响培养效率的因素,包括实验环境、实验材料的选择等。

 

一、实验环境

 

细胞培养环境需要严格无菌,甚至是空气都要使用新风系统进行过滤。对于墙壁、地板、桌面、超净工作台,更是要定期清洁。德国Minerva Biolabs公司的Mycoplasma-off™ WipesMycoplasma-off™直接用于实验环境、物品、仪器、设备的清洁。该试剂无需稀释,喷洒或擦拭后自然风干,即可高效清除环境中的微生物污染。

 

细胞培养环境中,培养箱水槽,水浴锅经常会有支原体以及各种细菌、霉菌滋生,稍有不慎或清洗不及时,水槽中的水源即会成为细胞污染的重要来源。保持水槽的洁净,对细胞培养的顺利进行非常重要。推荐:全球众多实验室日常都在使用德国MB公司生产的Water Shield™支原体污染防护剂(水槽用)。Water Shield™可持续作用四周,使水源避免受到支原体、细菌、真菌、霉菌、孢子的污染。1:200的比例,加到水浴锅或培养箱水盘的无菌水中即可

 

二、实验材料的选择

 

所培养的细胞,来源应清晰,确保无污染。对于培养试剂及耗材,也尽可能选择无菌的。

 

细胞离不开高品质血清。而胎牛血清作为天然的培养基,在培养实验中占有重要位置。选择胎牛血清的重要指标之一,就是考察内毒素的含量。

内毒素在细胞传代增殖过程中,会直接参与细胞凋亡的过程,一定剂量下,会给细胞培养带来很多问题,特别是免疫细胞和干细胞,例如:诱导免疫细胞释放炎症因子,抑制小鼠红细胞集落的形成等。因此,血清中内毒素含量越低,对细胞毒性越小,越利于细胞的生长和传代;反之,内毒素含量过高,会直接导致细胞状态不良,提前老化,甚至死亡。

 

基于以上研究,用于细胞培养的牛血清,要通过严格的内毒素水平检测,每一批血清都有完整的检测报告,通过内毒素的检测数值,对血清的品质进行分级和评估。

 

目前国际通用的分级方法,均以内毒素含量的高低来确定,内毒素含量越低,血清的级别就越高,以胎牛血清为例:

当血清中内毒素含量≤10EU/ml时,此血清为特级胎牛血清;

当血清中内毒素含量﹥10EU/ml≤ 25EU/ml时,此血清为优级胎牛血清;

当血清中内毒素含量≥25EU/ml时,此血清为标准级胎牛血清;

 

Ausbian®进口特级胎牛血清,澳洲血源,均经过严格筛选, 目前所有批次内毒素都低于3EU/ml,其中有的批次可以低至≤1EU/ml。更低的内毒素血清,更利于细胞的生长和传代。