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细胞支原体污染症状及处理方法

更新时间:2023-10-02  |  点击率:358

细胞污染是生物实验室中常见的问题之一,轻则引起细胞状态改变,降低实验结果的可重复性,重则会直接导致细胞的死亡,影响实验进度。本期内容,我们汇总了支原体污染的症状,并分别给出了应对方法。

 

一、生物污染

细胞的体外生存环境,可以说是“危机四伏"。空气中漂浮着各种肉眼难以捕捉的微生物,稍有不慎,细胞就会被感染。不仅如此,如果实验操作不够规范,还有可能出现细胞交叉污染的情况。

 

1、支原体污染

支原体(mycoplasma)是一类没有细胞壁、高度多形性、部分可用人工培养基培养增殖的原核细胞型微生物,大小为0.3微米左右。由于能形成丝状与分枝形状,故称为支原体。在细胞培养过程中,显微镜很难捕捉到它们的身影,与细胞竞争营养,影响细胞生长,最终导致实验出现偏差。

 

支原体的培养条件,与细胞培养条件高度重合,因此,支原体会与细胞共同竞争有限的生存资源。早有研究表明,一些支原体(包括最为常见的人型支原体、发酵支原体、精氨酸支原体等),通过精氨酸脱亚胺酶分解精氨酸来供能。当这些支原体混入细胞培养体系后,会与细胞争抢精氨酸,导致细胞“吃不饱饭",出现营养不良的症状:生长速率异常、活力下降、易脱壁等。而精氨酸又是细胞组蛋白的重要组成成分,缺乏精氨酸会严重影响组蛋白合成,引起染色体断裂。再加上细胞处于长期饥饿的状态,最终导致细胞生长变慢甚至死亡。

 

支原体通过黏附作用与细胞结合,获取细胞膜表面的脂质和胆固醇,破坏细胞膜的完整性,同时影响细胞间的信号传递。支原体会趁机侵入细胞,增加细胞中核酸内切酶的含量[2],导致细胞染色体异常进而死亡。经过支原体的这一番操作,细胞结构已经被严重破坏,随之而来的就是细胞形态改变、细胞易聚团、大面积细胞凋亡制造的蛋白碎片(也就是培养基中的碎片和小黑点)

 

正常情况下,培养基中养分会逐渐耗尽,细胞代谢废物会逐渐累积,上清液会变成黄色,因此要定期更换培养基。支原体也是如此——当培养体系中感染了支原体并大量繁殖的时候,会向外排放代谢产物,影响体系中的PH加快培养基变黄的速度

 

综上所述,如果你培养的细胞出现以下情况,基本可以确定是支原体感染了,可配合支原体检测试剂盒(Venor®Gem OneStep,货号:11-8025)进一步确认。

  

如果细胞被支原体污染,该如何处理?对于一些重要程度相对较低的细胞而言,祛除支原体成分较高,因此,此类被污染的培养物建议直接丢弃。

对于无法长期培养的珍贵样本或病毒收获液,则推荐使用德国MB公司的Mynox® (货号:10-0200)。含有来自枯草杆菌提取物,可特异性地与支原体膜结合,改变支原体膜通透性,从而使支原体在2-3小时内破溃死亡。

  

若是可以培养超过一个月的细胞,则推荐使用德国MB公司的Mynox® Gold(货号:10-0201),直接杀除+巩固防护两步处理,祛除支原体的同时,可进一步在后续培养中巩固清除效果,防止支原体卷土重来"

 细胞已发生支原体污染,但又不愿丢弃,希望继续培养:如已转染或大量扩增的细胞的情况。复合抗生素成分,抑制支原体蛋白和DNA合成,也抑制细菌和真菌。先使用厂家推荐的“悬浮冲洗法"处理好细胞,再使用加了Zell Shield®(货号:13-0050)的培养基养细胞,能达到更好的祛除支原体的效果。

 

与此同时,还应对细胞间进行消杀。使用专业的支原体祛除试剂,更加高效、安全和便捷。实验空间中的墙壁、实验台、桌椅板凳、显微镜、冰箱、离心机等设备和仪器,可使用Mycoplasma-off™Mycoplasma-off™ Wipes对其进行喷涂或擦拭,清除表面的多种微生物污染。对于水浴锅、培养箱水槽等环境,可以选择Water Shield™对其进行处理。讲产品按比例直接加入水浴锅或培养箱水槽中,可预防微生物污染。