细胞支原体污染症状及处理方法

细胞污染是生物实验室中常见的问题之一，轻则引起细胞状态改变，降低实验结果的可重复性，重则会直接导致细胞的死亡，影响实验进度。本期内容，我们汇总了支原体污染的症状，并分别给出了应对方法。

一、生物污染

细胞的体外生存环境，可以说是“危机四伏"。空气中漂浮着各种肉眼难以捕捉的微生物，稍有不慎，细胞就会被感染。不仅如此，如果实验操作不够规范，还有可能出现细胞交叉污染的情况。

1、支原体污染

支原体（mycoplasma）是一类没有细胞壁、高度多形性、部分可用人工培养基培养增殖的原核细胞型微生物，大小为0.3微米左右。由于能形成丝状与分枝形状，故称为支原体。在细胞培养过程中，显微镜很难捕捉到它们的身影，与细胞竞争营养，影响细胞生长，最终导致实验出现偏差。

支原体的培养条件，与细胞培养条件高度重合，因此，支原体会与细胞共同竞争有限的生存资源。早有研究表明，一些支原体（包括最为常见的人型支原体、发酵支原体、精氨酸支原体等），通过精氨酸脱亚胺酶分解精氨酸来供能。当这些支原体混入细胞培养体系后，会与细胞争抢精氨酸，导致细胞“吃不饱饭"，出现营养不良的症状：生长速率异常、活力下降、易脱壁等。而精氨酸又是细胞组蛋白的重要组成成分，缺乏精氨酸会严重影响组蛋白合成，引起染色体断裂。再加上细胞处于长期饥饿的状态，最终导致细胞生长变慢甚至死亡。

支原体通过黏附作用与细胞结合，获取细胞膜表面的脂质和胆固醇，破坏细胞膜的完整性，同时影响细胞间的信号传递。支原体会趁机侵入细胞，增加细胞中核酸内切酶的含量[2]，导致细胞染色体异常进而死亡。经过支原体的这一番操作，细胞结构已经被严重破坏，随之而来的就是细胞形态改变、细胞易聚团、大面积细胞凋亡制造的蛋白碎片（也就是培养基中的碎片和小黑点）

正常情况下，培养基中养分会逐渐耗尽，细胞代谢废物会逐渐累积，上清液会变成黄色，因此要定期更换培养基。支原体也是如此——当培养体系中感染了支原体并大量繁殖的时候，会向外排放代谢产物，影响体系中的PH，加快培养基变黄的速度。

综上所述，如果你培养的细胞出现以下情况，基本可以确定是支原体感染了，可配合支原体检测试剂盒（Venor®Gem OneStep，货号：11-8025）进一步确认。

如果细胞被支原体污染，该如何处理？对于一些重要程度相对较低的细胞而言，祛除支原体成分较高，因此，此类被污染的培养物建议直接丢弃。

对于无法长期培养的珍贵样本或病毒收获液，则推荐使用德国MB公司的Mynox® （货号：10-0200）。含有来自枯草杆菌提取物，可特异性地与支原体膜结合，改变支原体膜通透性，从而使支原体在2-3小时内破溃死亡。

若是可以培养超过一个月的细胞，则推荐使用德国MB公司的Mynox® Gold（货号：10-0201），直接杀除+巩固防护两步处理，祛除支原体的同时，可进一步在后续培养中巩固清除效果，防止支原体“卷土重来"。

 细胞已发生支原体污染，但又不愿丢弃，希望继续培养：如已转染或大量扩增的细胞的情况。复合抗生素成分，抑制支原体蛋白和DNA合成，也抑制细菌和真菌。先使用厂家推荐的“悬浮冲洗法"处理好细胞，再使用加了Zell Shield®（货号：13-0050）的培养基养细胞，能达到更好的祛除支原体的效果。

与此同时，还应对细胞间进行消杀。使用专业的支原体祛除试剂，更加高效、安全和便捷。实验空间中的墙壁、实验台、桌椅板凳、显微镜、冰箱、离心机等设备和仪器，可使用Mycoplasma-off™或Mycoplasma-off™ Wipes对其进行喷涂或擦拭，清除表面的多种微生物污染。对于水浴锅、培养箱水槽等环境，可以选择Water Shield™对其进行处理。讲产品按比例直接加入水浴锅或培养箱水槽中，可预防微生物污染。