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细胞治疗项目中,支原体检测的必要性

更新时间:2023-10-13  |  点击率:360

细胞治疗是用具有活性细胞制剂为主要成分来治疗或预防疾病的技术,细胞治疗领域的研究热点是干细胞和免疫细胞,应用这些技术,需要遵照相应的法律、法规与行政管理规定,其细胞来源、生产工艺和临床应用过程进行污染物的监控与检测。

 

当细胞受到支原体污染初期,通常难以观察到细胞的生长和形态方面的明显变化。然而,如果支原体污染严重,会导致细胞生长速度减缓,并在细胞之间形成膜片状的附着结构。此外,支原体的存在会抑制宿主细胞的核酸蛋白合成,影响细胞内一些重要酶和细胞因子的正常功能。这些影响最终会导致细胞增殖受到抑制,甚至停止,导致细胞碎片逐渐增多,最终导致细胞死亡。

 

不仅如此,如果细胞或者细胞产物被支原体污染,一旦此类药物用于临床,将造成不可挽回的后果。因此,在细胞治疗项目中,需要对是否存在支原体污染进行检测。常用的方法为qPCR的方法。

 

支原体荧光定量PCR法(qPCR):是在常规PCR基础上,将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记,使PCR扩增后的产物带有荧光,利用荧光信号的变化和配套软件,进行DNA扩增反应的实时监测,简称qPCR。该方法的优点:

①灵敏度高、特异性强。

②时间短,2-3小时出结果

③检测结果可定量

④操作简便

 

德国MB公司生产的支原体qPCR检测试剂盒(均为探针法检测),依据操作步骤的细微差别, 分『经典法』和『一步法』两种。  

此两类试剂盒较全球其他厂家同类产品,具有以下优点:

①经典法qPCR试剂盒遵循欧洲药典流程要求

②高特异性,一次检测即可涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种(涵盖欧洲药典规定的9种支原体),根据序列一致性,至少可以检测到107种支原体物种。操作简单,易于观察(使用MB的试剂盒,下表中列出的支原体物种均为阳性,其他微生物或真核细胞均为阴性,无交叉反应)。