兽用疫苗生产过程中，如何预防支原体污染？

在兽用疫苗的生产过程中，尤其是细胞培养步骤中，很容易发生支原体污染，进而影响疫苗质量，会给疫苗生产商或养殖户带来经济损失，同时也不利于畜禽疾病防控工作的顺利开展。造成支原体污染的原因也较多，工作环境、培养基、被污染的细胞、试验器材等都可能造成支原体的污染，从而使疫苗质量下降，安全性及免疫效果难以达到标准。

在日常的清洁与环境污染物监控过程中，应时刻关注支原体污染情况。

日常清洁中，应对实验环境进行消杀，可采用消毒试剂，对试验台、地面、墙壁等表面进行擦拭，推荐使用支原体专用清除试剂——德国MB公司生产的Mycoplasma-off，即用型支原体祛除喷雾剂，直接将试剂喷洒在待清洁物表面即可，高效清除物体表面的支原体、真菌、细菌、等污染。

还应定期对培养物进行取样检测，监控培养物是否被支原体污染。PCR是一种很好的手段。根据支原体核糖体16s-23s rRNA的特异保守序列设计引物，对待检样本DNA进行扩增，通过对扩增产物的大小分析作出诊断。德国MB公司的支原体常规PCR检测试剂盒，

①高特异性，一次检测即可涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种（涵盖欧洲药典规定的9种支原体），根据序列一致性，至少可以检测到107种支原体物种。操作简单，易于观察（使用MB的试剂盒，下表中列出的支原体物种均为阳性，其他微生物或真核细胞均为阴性，无交叉反应）。191bp为内控对照条带，表明PCR反应正常。当样本存在支原体污染时，由于内控对照与支原体DNA存在竞争，内控对照条带变弱（例如支原体DNA＞10^3拷贝）。

②高灵敏度，1-5拷贝/μl的支原体DNA即可检出。

③试剂盒含内控对照，可防止假阴性的发生。

④符合欧洲药典要求。