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透析胎牛血清:制备与应用

更新时间:2023-11-05  |  点击率:247

胎牛血清是广泛用于细胞培养基的重要成分,提供了多种生物活性物质,包括激素、生长因子、脂质、矿物质、黏附和铺展因子,以促进体外细胞培养。然而,在特定研究领域,透析胎牛血清也被用于满足研究需求。下文将从生产工艺和应用方面对透析胎牛血清进行综合介绍,以促进相关研究和应用的进行。

 

1. 透析胎牛血清的制备

a. 透析胎牛血清是基于普通胎牛血清进行特殊处理的产品。在制备过程中,普通胎牛血清需要经过严格的无菌处理,包括0.1微米膜三重过滤以及各项检测,如理化性质(如渗透压和pH值),成分(如内毒素和血红蛋白)以及外源因子(如细菌、病毒和支原体),以确保其质量和安全性。

 

b. 透析胎牛血清的制备涉及透析过程,通过特定的透析膜在4°C下将血清透析在0.15M NaCl中。这个透析膜只允许小于10 kDa的小分子通过,这些小分子在渗透压的作用下从血清中渗析到透析膜外的NaCl溶液中。透析的终止通常是当血清中葡萄糖浓度降至<5 mg/dL时,但透析过程还需要仔细监测pH值和渗透压。

 

c. 透析过程采用切向流过滤,即流体与过滤方向垂直的过滤方式,以减小滤膜上的物质堆积,确保稳定的过滤速度。

 

2. 透析胎牛血清的应用

透析胎牛血清主要用于特殊研究领域,其中需要关注小分子浓度的应用,包括以下四个领域,它们有时相互交叉。

 

a. 同位素标记技术在细胞培养中的应用。

同位素标记技术,例如Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC),是一种基于质谱的蛋白质组学技术。它通过将13C15N标记的氨基酸引入培养基,标记细胞内新合成的蛋白质,用于比较不同处理下的细胞蛋白质丰度。透析胎牛血清可用于排除天然氨基酸的干扰,以确保标记氨基酸的准确性。

 

b. 工程细胞株的筛选。

例如,CHO-DFGRˉ细胞株需要在培养基中添加次黄嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸才能生存。透析胎牛血清可用作选择培养基的一部分,以帮助筛选经过基因工程的细胞株。

 

c. 研究某些因子对细胞增殖和分化的影响。

透析胎牛血清可用于研究核苷酸、微量元素等对细胞的影响,以避免培养体系中的干扰物质。