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胎牛血清正确解冻方法步骤详解

更新时间:2024-04-19  |  点击率:98

在解冻胎牛血清之前,需要做好准备工作。首先,应确保实验室环境清洁,避免污染,可以使用紫外线照射无菌工作台和实验空间,同时配合使用实验室微生物污染祛除类试剂,比如德国Minerva Biolabs生产的Mycoplasma Off支原体祛除喷雾剂,对实验室进行清洁,降低胎牛血清在解冻、分装或使用过程中被污染的可能性。其次,准备好所需的实验器材,如无菌移液管、无菌试管,并确保这些器材是严格无菌的。此外,还需检查胎牛血清的包装是否完好无损,如有破损或污染,则不应使用。

 

胎牛血清这种混合物中,融化速度:蛋白质等干物质>水这类溶剂,所以蛋白质会先溶解析出,而水还是结成冰的状态,导致瓶子中间会出现一根透明的冰柱,而周围则会呈现上黄下红的分层浑浊液的状态,在使用过程中很容易引起沉淀、混合不均匀、局部浓度过高等问题,影响细胞生长。

 

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更重要的一点是,血清中珍贵的生长因子等活性物质,它们在解冻过程中,有着与细胞复苏类似的经历,都需要快速解冻才能很大程度地保留生物活性。显然,4℃过夜这样的长时间处理,很有可能会导致一部分「营养成分」的损失,影响细胞生长。因此,正确的解冻方法,应该是尽可能让胎牛血清所有成分同时融化。

 

我们推荐使用更科学“三步法"对胎牛血清进行解冻。根据待解冻的胎牛血清的量不同,按照下表中的建议时长与温度对其进行处理。需要注意的是,如果血清是储存在-80℃冰箱中,正式解冻前应先转移至-20℃冰箱中过渡。


操作

温度

100ml

500ml

1000ml

步骤一

室温

35 min

90 min

100 min

或15-20℃水浴

5 min

18 min

20 min

步骤二

20℃水浴

15 min

25 min

30 min

步骤三

37℃水浴

20 min

35 min

45 min