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如何让细胞更健康?清除实验室污染很重要

更新时间:2024-04-29  |  点击率:122

细胞培养的成功与否直接关系到实验结果的准确性和可重复性。微生物污染是影响细胞培养健康的重要因素之一。因此,在实验室工作和细胞培养过程中,高效预防或清除微生物污染十分重要。本期内容,一起来讨论细胞实验室中,预防、清除微生物污染的好方法。

 

一、如何预防细胞实验中的微生物污染

 

1、用科学有效的方法清洁实验环境

我们汇总了各大实验室的工作流程,希望可以给各位科研工作者提供参考:

 

实验室环境定期清洁:定期使用 Mycoplasma-off™支原体祛除喷雾剂(或湿巾),对工作区域消杀(建议半个月一次,但需根据细胞间实际使用频率决定)。

 

实验开始前的灭菌工作:每次实验开始前,和实验结束后,用紫外线对细胞间进行照射消毒,实验操作前用酒精或Mycoplasma-off™支原体祛除喷雾剂对操作人员的手套进行喷涂消毒。

 

实验仪器的定期清洁:在水浴锅或培养箱水槽的水中,加入 0.5% Water Shield™水槽支原体预防祛除试剂,可确保一个月内水源不会变成支原体、真菌或细菌的污染源。液氮罐也应定期用Mycoplasma-off™支原体祛除喷雾剂(或湿巾)进底消杀,并更换洁净的液氮,(液氮罐中冻存的细胞发生支原体污染,也会在液氮中引起污染的传播)。

 

2、选择合格的实验试剂

生物学实验很大程度上依赖各类生物学试剂的支持,其中,胎牛血清作为一种十分常见的生物学试剂,在细胞培养实验中发挥着重要作用,可以维持细胞的生长和健康。选择高品质的胎牛血清,能够尽可能降低细胞污染的风险。以实验室常用的Ausbian进口胎牛血清为例,通过7次加压过滤,最后3次为0.1 µm无菌过滤处理,通过严格的质量检测,所有微生物检测均为“未检出",有许多实验长期使用,为众多科研用户发布高水平文章提供支持。

 

3、严谨规范的实验操作

实验开始前:在正式进入细胞间前,需要在缓冲隔离间佩戴好细胞实验室专用的防护用具:口罩、防护服、鞋套等,开始实验前,佩戴好手套。

实验进行中:严格按照实验室的规章制度进行实验操作,注意不要交叉污染试剂,另外实验安全、实验垃圾的处理也要格外注意。

实验结束后:用Mycoplasma-off™支原体祛除喷雾剂是所使用过的实验台面、物品表面进行清洁。

 

二、如何祛除细胞中的微生物污染

当细胞被细菌、真菌或是支原体污染后,都不建议继续培养,尽量能够直接销毁,并对实验环境进行全面地清洁消毒。多数情况下,被真菌或细菌污染的细胞,“发病"迅速,还没来得及拯救,细胞就会集体“阵亡"。因此,如果细胞十分珍贵,不能随意丢弃,也建议仅对支原体污染的细胞进行拯救。

 

祛除细胞中支原体的有效方法:

 

1、对于非常珍贵的细胞株(不可再得的)国际上使用 Mynox® Gold珍贵细胞株支原体清除试剂,做 4 周左右的支原体祛除持续培养实验。

 

2、对于非常珍贵的细胞株或生物样品(无法长期培养的),可使用 Mynox®珍贵生物样品支原体清除试剂,对细胞做 3 小时左右的祛除支原体处理,处理完毕,冲洗细胞,将样品放入洁净的培养液中,重新培养或保存即可。

 

3、对于已经进行到中途的细胞实验,如果将培养的大量细胞丢弃,会造成高昂的实验成本损失。对于这样的情况,补救办法如下:在培养液中加入 10% Zell Shield®细胞支原体祛除试剂(一种新型复合抗生素)。按照厂家建议“悬浮冲洗"方法,配合处理细胞,培养 4 代以上,基本可祛除支原体污染。

悬浮冲洗法:

细胞消化后,将细胞转移至离心管进行离心,弃上清,加入PBS冲洗细胞后再次速离心弃上清,重复PBS冲洗过程3次后,用新鲜的含Zell Shield®细胞支原体祛除试剂的细胞培养液进行培养传代

Zell Shield®细胞支原体祛除试剂常规为-18℃保存,建议使用前,先融化分装,仍旧-18℃避光保存,使用时按需融化配制。避免反复冻融。

Zell Shield®细胞支原体祛除试剂按1:100浓度可直接加入培养基。例如:500ml培养基中添加5ml Zell Shield®细胞支原体祛除试剂,50mL/瓶的Zell Shield®细胞支原体祛除试剂可供5L培养基使用。

 

4、一些做原代培养的实验室,为了预防取原代细胞过程中可能会发生支原体污染,实验人员也可以在培养液中加入 10% Zell Shield®(一种新型复合抗生素),培养 4 代以上,即可撤掉 Zell Shield®,此过程可有效预防支原体污染的发生。