干细胞完全培养基：日常使用全攻略

干细胞完全培养基：日常使用全攻略  

一、储存与解冻：温度与时间的精准把控  

储存条件  

未开封培养基：严格按说明书要求储存（通常为-20℃或-80℃），避免反复冻融导致成分降解。  

已开封培养基：分装后-20℃保存（避免全部解冻后反复冻融），使用前需平衡至室温（约25℃），防止温度骤变损伤干细胞。  

禁忌：严禁将培养基置于4℃长期储存（>1周），易滋生微生物或导致成分沉淀。  

解冻规范  

缓慢解冻：将冻存培养基置于2-8℃冰箱过夜，或25℃水浴轻摇解冻（避免剧烈振荡产生气泡）。  

混匀步骤：解冻后轻柔颠倒混匀（勿漩涡振荡），防止成分分层或沉淀。  

分装建议：按单次使用量分装至无菌离心管，减少反复冻融次数（建议分装后-20℃保存，1个月内用完）。  

二、干细胞完全培养基的操作环境：无菌与稳定的双重保障  

无菌操作要求  

生物安全柜：提前30分钟开启紫外灯消毒，操作前用75%乙醇擦拭台面，全程佩戴无菌手套、口罩及实验服。  

气溶胶控制：离心后静置5分钟再开盖，避免气溶胶传播污染；开瓶/分装时瓶口倾斜，远离面部。  

器具专用：使用一次性无菌移液管、离心管，避免交叉污染（如污染细胞的处理工具严禁用于健康细胞）。  

环境稳定性  

温度波动：培养箱温度控制在37℃±0.5℃，避免频繁开关导致温度骤变。  

CO₂浓度：维持5%CO₂（气体需经无菌过滤），定期检测培养箱内CO₂传感器准确性。  

湿度控制：培养箱水盘加满无菌水，保持湿度>90%，防止培养基蒸发导致渗透压变化。  

三、培养过程：观察与调整的动态管理  

细胞状态监测  

形态观察：每日倒置显微镜下检查细胞形态（如间充质干细胞呈纺锤形、贴壁生长），若出现颗粒感、空泡或脱落，可能提示污染或培养基失效。  

生长曲线：定期绘制细胞生长曲线，若增殖速度显著下降（如倍增时间延长>20%），需排查培养基质量或细胞老化。  

pH指示：培养基颜色变化（如酚红变黄提示酸化，变紫提示碱化）需及时换液（正常pH为7.2-7.4）。  

换液与传代  

换液频率：根据细胞密度调整（如高密度细胞每2-3天换液，低密度细胞每4-5天换液），避免营养耗尽或代谢废物积累。  

传代时机：当细胞汇合度达80%-90%时传代（过早传代降低细胞活性，过晚导致接触抑制），传代比例建议1:3-1:5。  

消化控制：使用胰酶/EDTA消化时，严格计时（通常1-3分钟），显微镜下观察细胞变圆后立即终止消化，防止过度损伤。