细胞祛除支原体试剂使用中需要严格控制操作条件

精准控制试剂浓度与作用时间，遵循 “梯度测试” 原则

支原体祛除试剂的 “治疗窗口” 较窄（浓度过低无效，过高则毒性强），需按以下步骤操作：

预实验梯度测试：使用时，取少量污染细胞，设置 3-5 个试剂浓度梯度（如说明书推荐浓度的 0.5 倍、1 倍、1.5 倍）和空白对照（仅培养基），培养 24-48 小时后观察细胞形态（是否出现皱缩、脱落）和存活率（如台盼蓝染色检测），选择 “无明显细胞毒性且能抑制支原体” 的最佳浓度。

严格按说明书控制作用时间：

多数抗生素类试剂需连续作用 5-7 天（1 个支原体增殖周期约 6-8 小时，需覆盖 3-4 个周期以清除），不可随意延长（易导致细胞耐药性或积累毒性）；

酶解类试剂作用时间较短（通常 24-36 小时），需按时更换新鲜培养基，避免试剂残留对细胞的长期损伤。

避免与其他抗生素 / 添加剂混用，防止相互作用

禁止将支原体祛除试剂与常规细胞培养用抗生素（如青霉素、链霉素，仅抗细菌，对支原体无效）同时使用 —— 一方面可能增加细胞毒性（如青霉素与四环素联用会抑制细胞蛋白质合成），另一方面可能导致试剂成分降解（如部分试剂与含巯基的添加剂（如谷胱甘肽）反应，丧失活性）。

若培养基中含生长因子（如 EGF、bFGF），需确认试剂是否与之兼容（可查阅说明书或咨询厂家），必要时先添加试剂作用 12 小时后，再补加生长因子。

操作过程中避免试剂污染与失效

试剂需按说明书储存（如 2-8℃冷藏、-20℃冷冻，避免反复冻融），解冻后需在规定时间内使用（如解冻后 48 小时内），剩余试剂不可倒回原瓶（防止污染）；

添加试剂时需无菌操作（超净台内进行，使用无菌移液器和枪头），避免将外界细菌 / 真菌带入培养体系，导致 “二次污染”。