10%优质胎牛血清的配比步骤​，不要错过

10%优质胎牛血清的配比步骤​，不要错过  

以配制100mL10%胎牛血清培养基为例（可按比例缩放配体量，如配500mL则各组分按5倍增加），具体步骤如下：​  

（一）血清与培养基解冻​  

胎牛血清解冻：将冷冻的胎牛血清从-20℃冰箱取出，放入4℃冰箱缓慢解冻（解冻时间约12-24小时，根据血清体积调整，500mL血清约需24小时），严禁室温快速解冻或37℃水浴解冻（避免血清中蛋白质变性、营养成分破坏）；解冻过程中每隔6小时轻轻颠倒血清瓶1-2次，使血清成分均匀，防止局部沉淀。​  

基础培养基准备：将基础培养基从4℃冰箱取出，室温放置30分钟（平衡至室温，避免后续与血清混合时因温差产生冷凝水，导致污染）；若基础培养基为粉末状，需按说明书配制（如1包DMEM粉末溶解于950mL无菌去离子水，加入NaHCO₃调节pH，定容至1000mL后过滤灭菌），确保溶解充分、无颗粒。​  

（二）无菌配比操作​  

基础培养基量取：在生物安全柜内，用无菌25mL移液管吸取90mL基础培养基，缓慢注入无菌血清瓶中（注入时移液管靠近瓶壁，避免液体冲击产生气泡，气泡易携带环境微生物）；若需添加双抗，此时加入1mL青霉素-链霉素双抗（100×浓度），轻轻颠倒血清瓶3-5次，使双抗与培养基均匀混合。​  

胎牛血清添加：待血清解冻后，用无菌10mL移液管吸取10mL胎牛血清，缓慢加入上述基础培养基中（血清与培养基体积比严格控制为1:9，确保终浓度为10%）；加入过程中避免血清沾附在血清瓶瓶口（若沾附，用75%乙醇棉签擦拭消毒，防止污染），添加完成后轻轻颠倒血清瓶5-8次，使血清与培养基充分融合，混合过程避免剧烈振荡（防止蛋白质变性）。​  

（三）质量验证与分装​  

外观与无菌性检查：配比完成后，观察血清培养基外观——应为淡黄色透明液体，无浑浊、沉淀、絮状物（若出现异常，可能为血清污染或解冻不当，需废弃）；取1mL混合液接种至无菌LB培养基（细菌培养）和Sabouraud培养基（真菌培养），37℃培养24-48小时，无菌落生长则无菌性合格（若用于细胞培养，可先接种少量敏感细胞，如HeLa细胞，培养24小时观察细胞状态，无异常再批量使用）。​  

分装与保存：将合格的10%胎牛血清培养基按使用量分装至无菌离心管或培养瓶中（如每次使用20mL则分装为20mL/管），加盖后用parafilm膜密封瓶口（防止保存过程中污染）；短期使用（1周内）可存放于4℃冰箱，长期使用（1个月以上）需分装后放入-20℃冰箱冷冻保存，避免整瓶反复冻融（建议单次分装量为1-2次细胞培养用量）。