细胞支原体污染：多重因素交织的“隐形危机”

细胞支原体污染：多重因素交织的“隐形危机”  

细胞支原体污染核心的影响因素解析  

细胞支原体污染是细胞培养中的常见难题，其发生与传播受多重因素影响，主要可分为以下四大类：  

1.操作与人为因素  

无菌操作疏漏  

未规范使用生物安全柜、未佩戴手套/口罩，或操作时频繁走动导致气流扰动，增加支原体悬浮颗粒吸入风险。  

案例：某实验室因未及时更换培养箱水盘，导致支原体通过气溶胶传播至多个细胞系。  

交叉污染风险  

共用培养基、移液器或细胞培养瓶，未消毒实验器具（如酸浸泡不足或高压灭菌不完全）。  

数据：交叉污染是支原体污染的首要原因，占比超60%。  

细胞来源隐患  

引入未检测的污染细胞系，或使用未经验证的血清、培养基。  

案例：某研究团队因使用第三方提供的污染细胞，导致整个实验室的细胞系集体“沦陷”。  

2.环境与设备因素  

培养环境失控  

培养箱湿度过高（>80%）或温度波动（±1℃以上），促进支原体繁殖；CO₂浓度异常（如>6%）影响细胞代谢，降低抵抗力。  

数据：支原体在37℃、5%CO₂、95%湿度环境下繁殖速度最快。  

设备清洁不足  

生物安全柜滤膜未定期更换（建议每6-12个月更换），或培养箱内壁、水盘未定期清洁消毒（推荐使用70%乙醇或含氯消毒剂）。  

案例：某实验室因培养箱水盘长期未清洁，滋生支原体并扩散至全部细胞。  

气溶胶传播  

离心、振荡或开盖操作时产生气溶胶，支原体可悬浮于空气中数小时，通过气流扩散至其他培养区域。  

防护建议：在生物安全柜内操作，离心后静置5分钟再开盖。  

3.试剂与耗材因素  

血清质量风险  

使用未灭活支原体或支原体检测阴性的血清（如胎牛血清需通过PCR或培养法检测）。  

数据：劣质血清是支原体污染的第二大来源，占比约25%。  

培养基污染  

培养基配制过程中未过滤除菌（如使用0.22μm滤膜），或储存条件不当（如4℃超过1个月）。  

案例：某团队因自行配制培养基未严格无菌操作，导致支原体污染率飙升至40%。  

耗材交叉使用  

重复使用培养瓶、移液管或离心管，或未区分清洁区与污染区（如将污染细胞的处理工具用于健康细胞）。  

规范：一次性耗材严禁重复使用，实验器具需专用并标记。  

4.细胞自身因素  

细胞类型易感性  

贴壁细胞比悬浮细胞更易感染支原体，因贴壁生长增加接触污染源的机会。  

数据：贴壁细胞的支原体污染率是悬浮细胞的2-3倍。  

细胞状态脆弱性  

细胞密度过高（>90%汇合度）或传代次数过多（>30代），导致代谢废物积累、抵抗力下降。  

案例：某团队因细胞过度传代，支原体污染后细胞死亡率高达80%。  

缺乏抗生素保护  

未在培养基中添加支原体抑制抗生素，或抗生素浓度不足（如庆大霉素需50μg/mL）。  

争议：长期使用抗生素可能掩盖污染症状，但短期可降低污染风险。