干细胞培养基的使用注意事项（2025年版）

干细胞培养基是维持干细胞“干性”（自我更新与多向分化能力）、保证培养质量的核心要素，其使用需严格遵循​​无菌、精准、适配细胞类型​​的原则。以下是覆盖​​通用要求、特殊细胞类型需求、无血清培养基注意事项​​的全面指南，结合2025年最新临床与科研标准整理：  

干细胞培养基的核心注意事项

1.​​无菌操作是底线​​  

所有操作（培养基配制、细胞接种、传代、换液）必须在​​超净工作台​​或​​生物安全柜​​中进行，使用前用75%乙醇擦拭台面及器械。  

培养基、耗材（培养瓶、移液器吸头）需经​​高压灭菌​​（121℃，20分钟）或购买无菌产品，避免微生物污染（细菌、真菌、支原体）。  

操作人员需穿实验服、戴手套、口罩，避免唾液、汗液污染。  

2.​​培养基质量控制​​  

​​选择合规产品​​：要求提供​​成分清单、质量合格证明、无菌检测报告​​（如内毒素≤0.25EU/ml）。  

​​避免反复冻融​​：培养基中的生长因子、蛋白质易因反复冻融失活，需​​分装成小份（1-5ml/管）​​，于-20℃避光保存，使用前37℃水浴快速解冻（不超过10分钟）。  

​​检查外观与有效期​​：使用前观察培养基是否澄清（无沉淀、浑浊），颜色是否符合要求（如含酚红的培养基应为桃红色，pH7.2-7.4）；严禁使用过期培养基（一般有效期为6-12个月，具体以产品说明为准）。  

3.​​环境参数控制​​  

​​温度​​：维持在​​37±0.5℃​​（细胞代谢最适温度），避免温度波动（如培养箱门频繁开启）。  

​​CO₂浓度​​：5%CO₂（维持培养基pH稳定，通过HCO₃⁻缓冲系统），需定期校准培养箱的CO₂传感器。  

​​湿度​​：保持​​95%以上​​（防止培养基蒸发，导致渗透压升高），可在培养箱内放置水盘。  

4.​​细胞观察与监测​​  

​​每日镜检​​：用倒置显微镜观察细胞形态（如间充质干细胞的梭形、成纤维状；胚胎干细胞的圆形、克隆状）、密度（融合度）及是否有污染（如细菌的浑浊、真菌的菌丝）。  

​​活力检测​​：传代或冻存前需检测细胞活力，活力低的细胞会影响培养效果。  

​​定期检测“干性”​​：通过​​流式细胞术​​检测干细胞表面标志物，确保未分化状态。