罗氏支原体检测试剂盒工作注意事项详解

操作前准备与环境管理  

确保操作环境洁净无尘，使用超净台或生物安全柜，避免样本污染；操作前需洗手，穿戴防护装备。  

试剂检查：确认试剂包装完好、未过期，并仔细阅读说明书；阴性和阳性对照需随实验同步检测，确保结果可靠性。  

样本采集与处理规范  

采样部位需精准（如咽后扁桃体处），使用专用无菌棉签；血清/血浆样本需新鲜采集，2小时内检测最佳，避免抗体降解。  

样本需经16000g离心5分钟，PBS洗涤3次后重悬，高温水浴处理以释放DNA；含抑制物的样本（如细胞培养上清）需通过离心或DNA提取优化，必要时添加BSA中和抑制活性。  

实验操作关键点  

遵循标准流程：加样→孵育→洗涤→酶结合→显色→终止，每步需严格计时；使用酶标仪或qPCR仪时，确保仪器校准合格。  

防污染措施：操作全程无菌，避免气溶胶扩散；UNG酶系统可预防PCR产物污染，减少假阳性；内部质控品监控潜在抑制物干扰。  

罗氏支原体检测试剂盒质量控制与结果验证  

灵敏度与特异性：试剂盒可检测≥10CFU/mL支原体，覆盖150+种属，与CHO、HEK293等细胞系无交叉反应。  

结果判读：结合临床症状、动态变化（如抗体滴度4倍升高）及其他检查（如影像学）；假阴性需通过阳性对照实验验证，假阳性需排除操作污染。  

重复性与稳定性：批内/批间CV≤5%，有效期管理严格，2-8℃避光保存，避免冻融循环。  

生物安全与合规要求  

支原体可能具有致病性，需遵守生物安全二级防护；废弃物需高压灭菌处理，避免交叉污染。  

符合药典标准，通过NAT验证，支持细胞治疗产品放行检测；企业需持续监控质量，报告负面事件并执行召回程序。