细胞支原体污染日常动态的检测与监控

细胞支原体污染日常动态的检测与监控

个人卫生与环境管理  

操作防护：实验人员需穿戴专用防护服、手套及N95口罩，接触细胞前后用75%乙醇或含氯消毒剂消毒双手；避免用手直接触摸口鼻眼黏膜，减少飞沫传播风险。  

环境清洁：每日对生物安全柜台面、门把手等高频接触表面用0.1%新洁尔灭或紫外线照射30分钟消毒；每周清洁CO₂培养箱（含紫外线照射），废弃培养基需121℃高压灭菌15分钟。  

通风与隔离：实验室每日开窗通风2-3次，每次≥30分钟；新传入细胞株须在独立隔离舱培养2周，经PCR或荧光染色（DAPI/Hoechst）确认无支原体后方可转入主实验室。  

操作规范与试剂控制  

试剂筛选：选用经γ射线灭菌、支原体检测合格的胎牛血清及培养基，避免使用污染的试剂；培养基需过滤除菌（0.1μm滤膜），水浴锅和培养箱水源中可添加消毒试剂（如次氯酸钠）。  

无菌操作：细胞传代、换液时在层流生物安全柜内完成，避免交叉污染；禁止将抗生素作为常规添加剂，防止耐药性产生。  

细胞支原体污染日常动态的检测与监控  

检测技术：每月对连续传代细胞进行PCR检测（靶向16SrRNA基因），配合MycoAlert发光法（30分钟出结果）或荧光原位杂交（FISH）定位胞内支原体；培养基抽样检测可早期发现“隐形异常”（如pH异常稳定、细胞生长速率下降）。  

监测流程：建立主细胞库和工作细胞库，液氮冻存无污染原始株；污染细胞需隔离治疗，治愈后需连续3轮检测（间隔1周）确认无复发。  

污染处理与清除  

抗生素疗法：采用BM-Cyclin（泰妙菌素+米诺环素）或Plasmocin（大环内酯类+氟喹诺酮类）组合方案，治疗周期3周，82%-100%；严重污染时可联合0.1μm超滤或42℃热处理（注意细胞活性影响）。  

物理清除：紫外线（90μW/cm²照射30分钟）破坏支原体DNA，或采用巨噬细胞共培养吞噬游离支原体；污染器皿需高压灭菌或80℃干热处理2小时。  

健康管理与长期维护  

免疫力提升：均衡饮食（富含维生素C、锌、硒），规律作息（7-8小时睡眠），适度运动（如快走、游泳）；免疫功能低下者可接种流感疫苗降低呼吸道感染风险。  

应急预案：发现污染后立即隔离污染区，追溯污染源并全面消杀；污染细胞建议废弃并重新培养，避免交叉感染。