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CRISPR技术应用及成功的关键点,PCR Clean™助力科研

更新时间:2023-09-23  |  点击率:228

CRISPR是原核生物基因组内,一段短的重复序列,天然存在于细菌和古细菌中。在病毒和细菌的“进化斗争史"过程中,病毒可以把自身的基因整合到细菌中,进一步利用细菌的胞内“工具",帮助自己完成基因的复制过程;而细菌为了将病毒入侵带来的非己基因清除,进化出CRISPR-Cas9系统。利用该系统,细菌把病毒基因从自己的基因组上剪切掉。从整个过程来看,CRISPR-Cas9系统是细菌的“免疫系统",是抵抗病毒等外源遗传物质入侵的一种获得性免疫系统。

 

CRISPR-Cas9系统包含guide RNA,也被称为single guide RNAsgRNA,以及有核酸内切酶活性的Cas 9蛋白。

 

其中sgRNA包含了与目标DNA上特定基因序列互补的一段RNA序列,以及用于识别Cas9的一段序列。Cas9是一种酶,它充当CRISPR系统的剪刀"Cas9能够被程序性地引导到目标DNA上,并在特定的DNA序列位置切割DNA链。

 

在实验过程中,将sgRNACas9蛋白结合,形成一个复合物。这个复合物能够通过sgRNA的序列精确定位到目标基因的位置,并引导Cas9切割目标DNA。一旦DNA被切割,细胞的自身修复机制会介入,修复DNA损伤。DNA修复过程通常涉及两种主要机制。非同源末端连接(non-homologous end joiningNHEJ)通常导致随机的插入或删除DNA片段,从而引起基因突变。同源重组(homology-directed repairHDR)允许精确地插入新的DNA序列,实现精确的基因编辑。

 

CRISPR的成功应用,有诸多关键点,其中一项,就是对于实验环境中,核酸污染的控制。在PCR实验室中,DNA污染很难清除。即使只有一个污染的DNA分子被检测到,也会使整个PCR检测过程出现误差。为确保PCR试验数据准确,预防DNARNA交叉污染,PCR实验室大多会常备DNA/RNA污染清除剂。德国MB公司生产的PCR Clean™,可有效地降解大多数表面上(轻质金属或有色金属除外)的扩增子,质粒或基因组DNARNA。该产品还能有效地去除DNA酶和RNA酶。使用便捷,可直接喷洒在物体表面。保护实验人员,避免接触DNA污染。非碱性,无致癌性,成分安全。