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透析胎牛血清做灭活处理,应该怎么处理呢

更新时间:2021-12-27  |  点击率:711
  将该病毒的F蛋白(融合蛋白)序列克隆入质粒内,并转染293T细胞。转染后第20小时,细胞先在不含蛋氨酸和半胱氨酸的DMEM+透析胎牛血清中培养了45分钟(让细胞处于饥饿状态,因培养基中缺少氨基酸),再在同样上述培养基中培养,但添加了35S标记的蛋氨酸和半胱氨酸。
  培养4小时后进行分析。即裂解细胞后,用抗F蛋白的抗体捕获F蛋白、跑胶并进行放射自显影,分析F蛋白的表达情况。发现F蛋白的表达确实增加了,但突变后的F蛋白表达却无任何变化。结果证实,野生型的F蛋白确实参与病毒对宿主细胞的侵袭。
  值得指出的是,用35S标记的蛋氨酸和半胱氨酸用来标记细胞内的蛋白,结合免疫沉淀用于观察在某一过程中发生的某一蛋白的变化,从而发现该蛋白所扮演的角色,的确是一个普遍有效的方法(在研究信号分子磷酸化的方面,则需要使用32P标记的磷酸盐)。
  透析胎牛血清是否需要做灭活处理?这取决于您的应用。
  灭活过程中,会导致血清中某些成分被破坏,如氨基酸,维生素,生长因子等。所以只有在您的实验对血清有特殊要求时,才会考虑对血清进行灭活处理。如您的实验对血清中的某种组分敏感,需要去除该组分。常见的情况是需要去除血清中的补体蛋白,因为补体在机体中参与细胞杀伤,巨噬细胞和淋巴细胞活化,肥大细胞和血小板组胺释放,平滑肌收缩等过程,所以一般在免疫学相关研究中及肌细胞和干细胞的培养过程中需要对血清进行灭活处理。