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Biocoll细胞分离液正确分离方法和操作时的注意事项

更新时间:2022-05-23  |  点击率:712
  Biocoll细胞分离液是最早由德国Biochrom公司推出的新一代分离液。它除了可分离淋巴细胞外,更常用于胰岛细胞的分离。胰岛细胞的移植是一种有效的糖尿病新型疗法,可解决特别是I型糖尿病患者的胰岛细胞不足及功能低下的问题。
  Biocoll细胞分离液分离方法会影响胰岛的产率和存活率:
  因此,取材时需要注意
  1.胰脏应快速取材,保持包膜完整。
  2.对胰脏进行评估,在消化酶灌注前去除多余的脂肪和残留的十二指肠和脾脏。
  3.消化过程不宜进行震荡,以保证胰腺组织被灌注的消化酶液消化,而不是被胰腺所释放的胰蛋白酶消化。
  4.要保证胰岛的包膜完整,消化不能太充分。宁可不足,也不可过头,否则会影响胰岛纯化的产率。
  Biocoll细胞分离液操作步骤及注意:
  1.取全血,使用等量PBS稀释。(全血:HBSS=1:1)
  2.取离心管,加入与血稀释液等量的PBS于管底,将血液稀释液小心加至PBS液面上层。(小心不要使两种溶液混合,吸头接近液面,贴壁缓慢加入,尤其是两种溶液刚接触到的时候,一定要慢!慢!再慢!)
  3.离心:800g,30min,需要将制动降至低,即离心机自然降速至0,离心完毕将得到如图所示分层(一定要自然降速,或者只有1-2成的制动)
  4.吸取白膜层至新15mL离心管中。
  5.白膜层液体加10~15mlPBS离心,300g,10min,弃上清。沉淀再加PBS清洗一次,弃上清。
  6.沉淀加入正常培养的*培养基进行培养,2~3小时,使单核细胞贴壁。
  7.镜下观察细胞贴壁后,更换培养基,去除未贴壁细胞,保留下来的即为所需的单核细胞。