细胞治疗血清的保存和活性维护指南

细胞治疗血清的保存和活性维护指南 

细胞治疗血清保存流程与关键要点  

1.温度分级精准管理  

长期保存：需储存于-20℃至-80℃低温环境，优先选择-70℃超低温冰箱以大化活性保留，保存期限可达数年。血清结冰体积膨胀约10%，分装时须预留10%空间（如50mL管装45mL），避免冻裂污染。  

短期使用：4℃冷藏不超过1个月，超期易激活补体系统，导致免疫细胞（如T细胞、巨噬细胞）非特异性凋亡。  

2.分装与解冻规范操作  

分装策略：按单次用量分装为10-50mL小份，标注“批次+日期+温度”，避免反复冻融（超过3次活性下降25%以上）。  

解冻步骤：采用三步法——从-20℃/-80℃转至4℃溶解1天，再移至室温或37℃水浴轻摇至溶解，严禁直接高温解冻以防蛋白质凝集沉淀。  

热灭活慎用：仅在明确需要灭活补体时（如免疫实验）进行56℃/30分钟处理，否则易导致沉淀物增多，影响血清质量。  

3.无菌操作与污染防控  

环境与设备：操作前需对超净台、离心机、分装机进行紫外线/化学消毒，空气过滤系统持续运行。操作人员须穿戴无菌手套、口罩、防护服，避免气溶胶污染。  

物料管理：血清原料需验证无菌证明，分装容器（如无菌离心管）须耐低温且预消毒。解冻后若出现絮状沉淀（如脂蛋白变性），可离心（3000rpm/5分钟）去除，不影响活性则无需弃用。  

4.质量控制与监测  

外观检查：定期观察血清颜色、透明度，若出现浑浊、沉淀或异味，需立即停止使用并追溯原因。  

活性验证：通过细胞培养实验（如神经元贴壁率、增殖曲线）验证血清支持能力，确保与标准批次无显著差异。  

记录追溯：建立电子档案，记录保存温度、解冻时间、操作人员及环境监测数据，符合21CFRPart11电子记录要求。  

5.特殊场景处理  

含药血清：如中药药理实验中含药血清，需经56℃灭活、0.22μm滤膜除菌后分装，避免药物与血清成分相互作用。  

胎牛血清：通常不推荐热灭活，因其可能破坏生长因子活性，影响细胞增殖效率。